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本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的人食管成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的人食管成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 人食管成纖維原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 食管 |
英文名稱(chēng) | Human Esophageal Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X8035 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人食管成纖維細(xì)胞分離自食管組織；食管是咽和胃之間的消化管，食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短，隨著頸部的伸長(zhǎng)和心肺的下降，而逐漸增長(zhǎng)。食管可分為頸段、胸段和腹段。脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過(guò)膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。在發(fā)育過(guò)程中，食管的上皮細(xì)胞增殖，由單層變?yōu)閺?fù)層，食管使管腔變狹窄，甚至一度閉鎖，以后管腔又重新出現(xiàn)。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，黏膜層，包括上皮、固有層和黏膜肌層。食管的外膜，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，富有血管、淋巴管及。主要包含食管成纖維細(xì)胞，成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人食管成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
HS-4細(xì)胞，人皮膚癌細(xì)胞系 鼠沙門(mén)氏菌Ta97 雜交瘤(B類(lèi));Z172A4C4C6F3G12 | Rhesus antibody Rh GFRA4 GDNF家族受體α-4抗體 規(guī)格 0.2ml |
TPA(Human Tissue Polypeptide Antigen) ELISA Kit 人組織多肽抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml |
Integrin beta 7： 整合素β7抗體 0.1ml | TRACP-5b(Mouse tartrate-resistant acid phosphatase 5b)ELISA Kit 小鼠抗酸性0酸酶5b 96T |
Rhesus antibody Rh RHCG RH血型C糖蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Phospho-LAT (Tyr171) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化T細(xì)胞活化連接蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh phospho-Tau protein(Ser214) 0酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | ECP ELISA Kit 大鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白 96T |
XCL1 Protein Canine 重組狗 XCL1 蛋白 (His 標(biāo)簽) | 倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;HL-1 |
小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);DG6-GFP 小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | HET-1A, 人食管上皮細(xì)胞 Human |
小鼠卵巢成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 白細(xì)胞介素-12超家族 |
人淋巴成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 小鼠小腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
P9小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 P9 mouse bone marrow somal cells 1640+10%FBS | 人食管成纖維原代細(xì)胞TRACP-5b(Mouse tartrate-resistant acid phosphatase 5b)ELISA Kit 小鼠抗酸性0酸酶5b 96T |
A498 腎癌 | BC-021(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠子細(xì)胞;U14-GFP |
LTA4H Others Mouse 小鼠 Leukoiene A4 Hydrolase / LTA4H 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CM-H052人胎盤(pán)絨毛膜細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞;NCI-H157 | Rhesus antibody Rh APOA4 載脂蛋白A4抗體 規(guī)格 0.2ml |
BIRC6： Apollon凋亡抑制蛋白抗體 0.2ml | 大鼠源細(xì)胞 |
Anti-A/H1N1-M2 Human /Biotin 標(biāo)記兔抗人A型人流感病毒H1N1-M2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | phospholamban： 受0蛋白/心臟0蛋白抗體 0.1ml |
Anti-CD177/FITC 熒光素標(biāo)記CD177抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | XCL1 Protein Canine 重組狗 XCL1 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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