人外周血T淋巴原代細(xì)胞

人外周血T淋巴原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：人原代乳腺癌組織源細(xì)胞 人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞 英文名稱(chēng)： MuM－2C Walker/LLC-WRC 256 大鼠腹水癌細(xì)胞 1ml/T75 人前列腺平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL PK136 小鼠 X 小鼠 小鼠原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞

人外周血T淋巴原代細(xì)胞

人外周血T淋巴細(xì)胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱(chēng)為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類(lèi)開(kāi)始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念。外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）即外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。目前，主要的分離方法是密度梯度離心法，因?yàn)檠褐懈饔行纬煞值谋戎卮嬖诓町?，因此得以分離出不同的細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞（T-lymphocyte）來(lái)源于骨髓的多能干細(xì)胞（胚胎期則來(lái)源于卵黃囊和肝）。在人體胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干細(xì)胞或前T細(xì)胞遷移到胸腺內(nèi)，在胸腺激素的誘導(dǎo)下分化成熟，成為具有免疫活性的T細(xì)胞。成熟的T細(xì)胞經(jīng)血流分布至外周免疫器官的胸腺依賴(lài)區(qū)定居，并可經(jīng)淋巴管、外周血和組織液等進(jìn)行再循環(huán)，發(fā)揮細(xì)胞免疫及免疫調(diào)節(jié)等功能。T細(xì)胞的再循環(huán)有利于廣泛接觸進(jìn)入體內(nèi)的抗原物質(zhì)，加強(qiáng)免疫應(yīng)答，較長(zhǎng)期保持免疫記憶。T細(xì)胞的細(xì)胞膜上有許多不同的標(biāo)志，主要是表面抗原和表面受體。這些表面標(biāo)志都是結(jié)合在細(xì)胞膜上的巨蛋白分子。多能干細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榱馨蜆忧绑w細(xì)胞（Lymphoid precursor）遷移至胸腺，在的誘導(dǎo)下，經(jīng)歷一系列有序的分化過(guò)程，逐漸在胸腺發(fā)育成熟為識(shí)別各種抗原的T細(xì)胞庫(kù)。T淋巴細(xì)胞進(jìn)入胸腺后首先經(jīng)歷兩個(gè)階段：①早期T淋巴細(xì)胞發(fā)育階段，即始祖CIM和CD8雙陰性T淋巴細(xì)胞（double negative cell，DN）分化為CD4和CD8雙陽(yáng)性T細(xì)胞（double positive cell，DP）；②DP細(xì)胞分別經(jīng)歷陽(yáng)性選擇階段和陰性選擇階段獲取MHC限制性識(shí)別能力和對(duì)自身抗原的耐受性，發(fā)育為其表面標(biāo)志為CD4或CD8的單陽(yáng)性T細(xì)胞（single positive cell，SP），遷往周?chē)馨推鞴俣ň印?span>T細(xì)胞是相當(dāng)復(fù)雜的不均一體、又不斷在體內(nèi)更新、在同一時(shí)間可以存在不同發(fā)育階段或功能的亞群，但分類(lèi)原則和命名比較混亂，尚未統(tǒng)一。按免疫應(yīng)答中的功能不同，可將T細(xì)胞分成若干亞群，一致的有：1、輔助性T細(xì)胞（Helper T cells,Th），具有協(xié)助體液免疫和細(xì)胞免疫的功能；2、抑制性T細(xì)胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制細(xì)胞免疫及體液免疫的功能；3、效應(yīng)T細(xì)胞（Effector T cells,Te），具有釋放淋巴因子的功能；4、細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Cytotoxic T cells,Tc），具有殺傷靶細(xì)胞的功能；5、遲發(fā)性反應(yīng)T細(xì)胞（Delayed type hypersensitivity T cells,Td），有參與Ⅳ型反應(yīng)的作用；放大T細(xì)胞（Ta），可作用于Th和Ts，有擴(kuò)大免疫效果的作用；6、原始的或天然T細(xì)胞（Virgin or Natural T cells），他們和抗原接觸后分化成效應(yīng)T細(xì)胞和記憶T細(xì)胞；7、記憶T細(xì)胞（Memory T cell,Tm），有記憶特異性抗原刺激的作用。T細(xì)胞在體內(nèi)存活的時(shí)間可數(shù)月至數(shù)年。其記憶細(xì)胞存活的時(shí)間則更長(zhǎng)。其中，Th細(xì)胞又被稱(chēng)為CD4+細(xì)胞，因?yàn)槠湓诒砻姹磉_(dá)CD4（cluster of differentiation 4）。通過(guò)與MHCⅡ（主要組織相容性復(fù)合體，major histocompatibility complex）遞呈的多肽抗原反應(yīng)被激活。MHCⅡ在抗原遞呈細(xì)胞（antigen presenting cells,APCs）表面表達(dá)。一旦激活，可以分泌細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)或者協(xié)助免疫反應(yīng)。Tc細(xì)胞又名為CD8+細(xì)胞，其表面表達(dá)CD8。這類(lèi)細(xì)胞可以通過(guò)MHCI與抗原直接結(jié)合。淋巴細(xì)胞主要包括T淋巴細(xì)胞（CD3+），B淋巴細(xì)胞（CD19+），NK細(xì)胞（CD16+CD56+）。

產(chǎn)品名稱(chēng)：人外周血T淋巴細(xì)胞

組織來(lái)源：外周血

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含IL-2、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：懸浮

細(xì)胞形態(tài)：圓形

傳代特性：不建議傳代

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人外周血T淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血T淋巴采用取外周血、通過(guò)密度梯度離心法結(jié)合磁珠分選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血T淋巴經(jīng)CD3免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。