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詳細(xì)介紹
人外周血樹突狀原代細(xì)胞(DC細(xì)胞)
人外周血DC細(xì)胞分離自外周血，由外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念。DC細(xì)胞，全稱樹突狀細(xì)胞(DC)，是近年來倍受們關(guān)注的專職抗原呈遞細(xì)胞(APC)，能攝取、加工及呈遞抗原，啟動(dòng)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。由美國學(xué)者Steinman于1973年在淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn)，從脾臟中分離出一類與粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞形態(tài)和功都不同的白細(xì)胞，因其細(xì)胞膜向外伸出，形成與細(xì)胞軸突相似的膜性樹狀突起，故而命名為樹突狀細(xì)胞。未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力，成熟DC能有效激活初始型T細(xì)胞，處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。
英文名稱 | Human Peripheral Blood Maturation Dendritic Cells | 組織來源 | 外周血 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7542 |
細(xì)胞形態(tài) | 樹突狀 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人外周血樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)
組織來源：外周血
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 半貼半懸浮
細(xì)胞形態(tài) 樹突狀
傳代特性 屬于高度分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血DC采用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞、培養(yǎng)過程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血樹突狀細(xì)胞經(jīng)CD86免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E1 舌鱗癌細(xì)胞，Tca-8113細(xì)胞 MADB106細(xì)胞，大鼠腺癌細(xì)胞系 | phospho-CDC16(Ser560)： 0酸化細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體 0.1ml |
Anti-HOXB4 HOXB4抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ABCA5 三0酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A亞基5抗體 規(guī)格 0.2ml |
anti-cath-L/CL /FITC 熒光素標(biāo)記組織蛋白酶L抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ID4 DNA結(jié)合抑制因子4抗體 規(guī)格 0.1ml |
AQP1(Aquaporin1) 水通道蛋白-1抗原 0.5mg | HLA E： 人類白細(xì)胞抗原E抗體 0.2ml |
IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM120C 構(gòu)成激活過氧化酶活化增生受體γ樣蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml |
人胚胎氣管組織來源細(xì)胞;CCC-HBE-2 | CM-H025人胰腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
HuTu-80細(xì)胞，人十二指腸腺癌細(xì)胞 人黑色素瘤細(xì)胞,HME2細(xì)胞 人肝永生化細(xì)胞;THLE-3 | H9c2(2-1) (大鼠心肌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
CL-0213SK-MES-1(人肺鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | A549(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
大鼠骨肉瘤細(xì)胞;UMR-106 | CF Protein Rat 重組大鼠 CF / Ciliary Neuroophic Factor 蛋白 |
NCI-H446細(xì)胞，小細(xì)胞肺癌 人血液白血病細(xì)胞,TF-1細(xì)胞 人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PG-BE1 | 人外周血樹突狀原代細(xì)胞(DC細(xì)胞)Rhesus antibody Rh ID4 DNA結(jié)合抑制因子4抗體 規(guī)格 0.1ml |
雜交瘤(B類);Z1510A2G6A2C7 | AKT1 Others Human 人 AKT1 / PKB / PKBα 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
B95-8細(xì)胞，產(chǎn)EBV的絨猴白細(xì)胞 A549(人肺腺癌細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1 | 小鼠角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
KM小鼠子瘤株;U27 | Rhesus antibody Rh sIgA/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格 0.5ml |
SP-D(Human Pulmonary surfatcant-associated protein D) ELISA Kit 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D 96T | Hs 578T(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
Beta-Amyloid (31-35) β淀粉樣肽31-35(多肽蛋白)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1mg | f- BetahCG(Human free chorionic gonadotropin) ELISA KIT 人游離β絨毛膜Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MTM1： 肌微管素1抗體 0.2ml | 人胚胎氣管組織來源細(xì)胞;CCC-HBE-2 |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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