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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血未成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞、培養(yǎng)過程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血樹突狀細(xì)胞經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、 細(xì) 胞形態(tài)等綜合鑒定，純度可達(dá)80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人外周血樹突狀原代細(xì)胞(未成熟DC細(xì)胞) | 組織來源 | 外周血 |
英文名稱 | Human Peripheral Blood Immature Dendritic Cells | 貨號 | YS-01X8307 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
人外周血DC細(xì)胞分離自外周血，由外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細(xì)胞分為成熟樹突狀細(xì)胞和未 成熟樹突狀細(xì)胞，典型的未成熟樹突狀細(xì)胞呈半貼壁生長，在GM- CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則，表面皺褶多，亦可見少量短刺狀突，胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見吞噬泡，具有較強(qiáng)的遷移能力，伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞，貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細(xì)胞由未成熟DC進(jìn)一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導(dǎo)而成，多數(shù)呈懸浮生長， 細(xì)胞呈圓形，細(xì)胞體積進(jìn)一步增大，表面大量粗細(xì)不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞。未成熟DC細(xì)胞長時間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。DC細(xì)胞尚無特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志，主要通過形態(tài)學(xué)、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定。其中成熟樹突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子，進(jìn)而激活T淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)；未成熟樹突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng) 答，不能激活T細(xì)胞的第二信號，可導(dǎo)致T細(xì)胞無能，從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細(xì)胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低，一般在30%以下。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài)：圓形、梭形、多角形，形態(tài)多樣
傳代特性：屬于高度分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人外周血樹突狀細(xì)胞(未成熟DC細(xì)胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
95-D細(xì)胞，高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞 人喉癌細(xì)胞,M2e細(xì)胞 正常大鼠腎細(xì)胞;NRK | Rhesus antibody Rh GFP 綠色熒光蛋白(免疫組化用抗體) 規(guī)格 0.1ml |
Human Pancreatic carcinoma markers-CA242 ELISA Kit 人胰腺癌標(biāo)志物CA242Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml |
IASPP： 細(xì)胞凋亡ASPP家族的另一個成員抗體 0.1ml | LSP(Human liver specific lipoprotein) ELISA Kit 人抗肝特異性脂蛋白抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RGS4 精神分裂癥相關(guān)蛋白9抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Phospho-LATS1 (Ser909) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化抑制基因LATS1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-TAK1(Thr187) 0酸化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶1 規(guī)格 0.1ml | SDF-1a/CXCL12(Human Stromal cell derived factor 1a) ELISA Kit 人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a 96T |
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A2 | BRL-3A 大鼠正常肝細(xì)胞 |
CL-0118HT-29(人結(jié)腸癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人絨毛間充質(zhì)成纖維細(xì)胞 |
CM-H040人結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | RLFs, 大鼠肺成纖維細(xì)胞 Rattus |
大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞;IEC-6 | 小鼠直腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
正常小鼠Leydig細(xì)胞;TM3 小鼠子宮頸上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 人外周血樹突狀原代細(xì)胞(未成熟DC細(xì)胞)LSP(Human liver specific lipoprotein) ELISA Kit 人抗肝特異性脂蛋白抗體 96T |
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H446 | VWC2 Others Human 人 VWC2 / Brorin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
IL17RA Others Rat 大鼠 IL17RA / IL17R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-H060人支持細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
雜交瘤(B類);C3110D2E11 | Rhesus antibody Rh APNG/MPG N-甲基嘌呤DNA糖基化酶 規(guī)格 0.2ml |
BNP： 腦素/利肽抗體 0.1ml | 豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL2 |
Anti-Rad17/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞周期檢控Rad17蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PKR： 蛋白激酶R抗體 0.1ml |
Anti-CD244/NKR2B4/SLAMF4/FITC 熒光素標(biāo)記CD244抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A2 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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