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詳細(xì)介紹
人真皮微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞
人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自真皮組織；真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質(zhì)內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細(xì)胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì)。微血管內(nèi)皮細(xì)胞（MEC）在炎癥反應(yīng)、腫瘤生長、創(chuàng)面愈合過程中起著非常重要的作用。在創(chuàng)面愈合研究領(lǐng)域，由于表皮細(xì)胞、真皮成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)的成熟，人們對這兩種細(xì)胞早已進(jìn)行了大量深入的研究。與之相比，對參與創(chuàng)面愈合過程的另一種主要細(xì)胞——真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞，則因其體外分離培養(yǎng)技術(shù)的困難而使相關(guān)的研究受限。
英文名稱 | Human Dermal Microvascular Endothelial Cells | 組織來源 | 皮膚組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7329 |
細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞
組織來源：皮膚組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人真皮微血管內(nèi)皮采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人真皮微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-C2 | Neurabin 2： 組織特異性F肌動蛋白結(jié)合蛋白2抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Mcl1/BCL2L3 髓樣分化蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-TSARG3/FITC 熒光素標(biāo)記生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
STAT3(signal transducers and activators of transduction3) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗原 0.5mg | Anti-OPN 骨橋蛋白抗體(分泌型0蛋白1)人Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
Anti-GADD45/FITC 熒光素標(biāo)記生長抑制DNA損傷基因45抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC26A4 碘單獨(dú)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SLC26A4抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti-PGRN /FITC 熒光素標(biāo)記顆粒蛋白前體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-AT/AGT /FITC 熒光素標(biāo)記血管緊張素原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
IL18R1 Others Rat 大鼠 IL18R1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | P815(小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 CD1B & B2M Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT 116 [HCT116] | 人成纖維母細(xì)胞-胎兒(HDF-f)( 5×105 ) |
FGFR4 Others Mouse 小鼠 FGFR4 / CD334 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CDK4 Others Human 人 CDK4 / CMM3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CDH5 Others Mouse 小鼠 CDH5 / CD144 / VE-Cad 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | RSPO1 Others Human 人 R-Spondin 1 / RSPO1 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
QBC-939, 人膽管癌細(xì)胞 | 人真皮微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞Anti-OPN 骨橋蛋白抗體(分泌型0蛋白1)人Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
CN3 Others Rat 大鼠 Coactin 3 / CN3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
婆羅門牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-3 | Anglne(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R067大鼠腎足突細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 人胚腎細(xì)胞-F克隆;293F |
MKN-45人胃癌細(xì)胞 Human gasic cancer cells MKN-45 1640+10% FBS | GTDC1： 糖基轉(zhuǎn)移酶樣1抗體 0.2ml |
Human major histocompatibility complex II ,MHC II /HLA- II ELISA Kit 人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | CD164 Others Rat 大鼠 CD164 / Endolyn 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
蛋白裂解酶抗體 Anti-Matriptase 0.2ml | HCV-IgM(Human Hepatitis C virus IgM) ELISA Kit 人丙型肝炎IgM 96T |
ATXN3L： 小腦脊髓共濟(jì)失調(diào)蛋白3抗體 0.2ml | IL18R1 Others Rat 大鼠 IL18R1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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