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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的人終板軟骨采用膠原酶 - 蛋白酶聯(lián)合消化并結(jié)合軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的人終板軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人終板軟骨原代細(xì)胞 | 組織來源 | 椎間盤 |
英文名稱 | Human Endplate Chondrocyte Cells | 貨號(hào) | YS-01X8313 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人終板軟骨細(xì)胞分離自椎間盤終板軟骨組織；椎體終板是椎體在生長(zhǎng)發(fā)育過程中， 椎體上下面的骨骺板骨化停止后形成骨板，呈輕度凹陷，即為骨性終板。椎體終板的中央仍為一薄層透明軟骨覆蓋，并終生存在，即為軟骨終板，上下軟骨終板與髓核和纖維環(huán)連接共同構(gòu)成椎間盤。椎體終板構(gòu)成了椎間盤的上下邊界，位于椎體中心的松質(zhì)骨和椎間盤之間。是由軟骨下骨和厚度相當(dāng)?shù)母采w其上的軟骨組成。主要作用是防止椎間盤髓核組織嵌入椎體，同時(shí)具有平衡分散應(yīng)力的作用。成熟的終板軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些終板軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群。電鏡下，終板軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，終板軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的終板軟骨細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、EGF、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每3-4天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人終板軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
WISH人羊膜細(xì)胞 Human WISH cells MEM(GIBCO)+10%FBS | ANKRD53： 錨蛋白重復(fù)域53抗體 0.2ml |
Anti-HPR1/p84 核基質(zhì)p84蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh AAT/Tryptase α-1抗酶抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti-phospho-CBL2(Tyr731) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化原癌蛋白CBL2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ICAM4/CD242 細(xì)胞間粘附分子4抗體 規(guī)格 0.2ml |
apoA1 (Apolipoprotein/APOA1 protein )human 載脂蛋白A1抗原 0.5mg | HPV16 E6 protein： 人類狀瘤病毒16抗體 0.1ml |
Goat Anti-rabbit IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的羊抗兔IgG 0.3ml | Rhesus antibody Rh FAK/PTK2 粘著斑激酶抗體 規(guī)格 0.1ml |
PROK1 Protein Human 重組人 EG-VEGF / prokineticin-1 蛋白 (His 標(biāo)簽) | 人胎盤羊膜細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
SAC-II B2細(xì)胞，小鼠腹水瘤細(xì)胞 BRL 3A(大鼠肝細(xì)胞) 人皮膚成纖維細(xì)胞;CCC-HSF-1 | CCL11 Protein Human 重組人 CCL11 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
人胚肺成纖維細(xì)胞;HFL1 | 人胚肺成纖維細(xì)胞;WI-38 [WI38] |
Li-7 人肝癌細(xì)胞 | LIF Protein Mouse 重組小鼠 LIF 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) |
狗腎細(xì)胞;Super Tube 胚胎成纖維細(xì)胞，3T6-Swiss albino細(xì)胞 Hed68細(xì)胞，果子貍腎上皮細(xì)胞 | 人終板軟骨原代細(xì)胞Rhesus antibody Rh ICAM4/CD242 細(xì)胞間粘附分子4抗體 規(guī)格 0.2ml |
IL2 Protein Rat 重組大鼠 Ierleukin-2 / IL-2 蛋白 | 小鼠顆粒元(MGC)(1×106) |
LTEP-P細(xì)胞，人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 小鼠前成骨細(xì)胞,MC-3T3細(xì)胞 CL-0130K-562(人慢性骨髓性白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 小鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
MiaPaCa-2, 人胰腺癌細(xì)胞 | Rhesus antibody Rh sIgA/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格 0.1ml |
TIMP-3(Human tissue inhibitors of metalloproteinase 3) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3 96T | CoC1/DDP(人卵巢耐藥細(xì)胞亞株) 5×106cells/瓶×2 |
MMP-9(matrix metalloproteinase 9) 基質(zhì)金屬蛋白酶-9(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | T(Human Testoterone) ELISA Kit 人睪酮Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MrpL39： 線粒體核糖體蛋白L39 0.1ml | PROK1 Protein Human 重組人 EG-VEGF / prokineticin-1 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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