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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔表皮角化細(xì)胞先蛋白酶消化、后-膠原酶混合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔表皮角化經(jīng)PCNA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔表皮角化原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 皮膚 |
英文名稱 | Rabbit Epidermal Keratinized Cells | 貨號(hào) | YS-01X8322 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔表皮角化細(xì)胞分離自皮膚組織；表皮位于動(dòng)物皮膚的外層，由胚胎時(shí)期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。表皮角化細(xì)胞（KC）是構(gòu)成表皮的主要細(xì)胞成分，在體內(nèi)處于不斷增殖過(guò)程中，分裂的角化細(xì)胞主要位于其基底層，少數(shù)位于棘細(xì)胞層。隨著向表層的推移，細(xì)胞的分化程度逐漸增加，并喪失分裂活性。
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔表皮角化細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
FD6細(xì)胞，人淋巴細(xì)胞與倉(cāng)鼠肺細(xì)胞雜交細(xì)胞 小鼠畸胎瘤細(xì)胞,P19細(xì)胞 CM-H103胎兒真皮成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | TSGF ELISA Kit 大鼠特異生長(zhǎng)因子/相關(guān)因子 96T |
RHCG： RH血型C糖蛋白抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh PTRH2 Bcl-2轉(zhuǎn)錄抑制因子1抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Heamachrome/FITC 熒光素標(biāo)記血紅素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CLK3： 細(xì)胞分裂周期樣激酶3抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh B-Raf B Raf抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-CXCL9/MIG/CMK/FITC 熒光素標(biāo)記γ干擾素誘導(dǎo)單核細(xì)胞因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Fe65 蛋白抗體 Anti-Fe65 protein 0.2ml | ABLIM3： 肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白LIM蛋白3抗體 0.2ml |
P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | 恒河猴腎細(xì)胞;LLC-MK2 |
NCI-H838細(xì)胞，人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 大鼠正常肝細(xì)胞,BRL-3A細(xì)胞 CM-R055大鼠卵巢成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | RBL-2H3(大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW480 [SW 480;SW-480] | BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細(xì)胞株 Human |
人上皮細(xì)胞;MCF-10A | CL-0108HIC(人小腸癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類);Pan02-CAG-tTA-4B3 蛋白酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL | 兔表皮角化原代細(xì)胞CLK3： 細(xì)胞分裂周期樣激酶3抗體 0.2ml |
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO E6 | Vero細(xì)胞，綠猴腎細(xì)胞 RSC96(大鼠雪旺細(xì)胞) 小鼠肉瘤瘤株;S180 |
HFF-1(人成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 克雷伯肺炎桿菌 | IL25 Protein Mouse 重組小鼠 IL25 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.3ml |
Rhesus antibody Rh GRM2+GRM4 促代謝型谷受體2+4抗體 規(guī)格 0.2ml | 人絨毛間葉成纖維細(xì)胞RNAHVMF miRNA5 μg |
ERp19： 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp19抗體 0.2ml | Anti-Ly-6G/Gr-1 淋巴細(xì)胞抗原6G抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
IP-10/CXCL10(Mouse interferon-inducible protein 10) ELISA Kit 小鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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