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詳細(xì)介紹
兔腸道干原代細(xì)胞
兔腸道干細(xì)胞分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至門的消化管。腸是消化管中長(zhǎng)的一段，也是功能重要的一段。哺乳動(dòng)物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的，大腸主要濃縮食物殘?jiān)?，形成糞便，再通過(guò)直腸經(jīng)門排出體外。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實(shí)它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機(jī)體內(nèi)大的微生態(tài)系統(tǒng)。腸道干細(xì)胞（ISC）也稱腸道上皮干細(xì)胞，主要位于腸黏膜隱窩內(nèi)，其與腸道黏膜上皮的更新和修復(fù)密切相關(guān)。正常情況下，位于隱窩基底部的腸道干細(xì)胞不斷向隱窩頂部（腸腔方向）遷移，整個(gè)遷移過(guò)程大約3-5d，在遷移過(guò)程中腸道干細(xì)胞分化形成不同的腸黏膜細(xì)胞。當(dāng)受到外界生理或病理信號(hào)作用時(shí)，ISC可持續(xù)增殖、分化為成熟腸上皮細(xì)胞，如腸型細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞和潘氏細(xì)胞等，從而維持腸道黏膜結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定性。
英文名稱 | Rabbit Intestinal Stem Cells | 組織來(lái)源 | 腸 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8325 |
細(xì)胞形態(tài) | 球形 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔腸道干細(xì)胞
組織來(lái)源：腸
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：懸浮
細(xì)胞形態(tài)：球形
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔腸道干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸道干采用-膠原酶聯(lián)合消化后，用腸道干細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸道干經(jīng)MSI-1免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
小鼠心肌細(xì)胞MCM | histon-H2b ELISA Kit 大鼠組蛋白H2bMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
Actin Regulatory Protein CAPG： 肌動(dòng)蛋白調(diào)節(jié)蛋白CAPG抗體 0.2ml | GABRR1： G基A型受體rho1 /GABAA Rρ1抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh CEACAM16/CEAL2 癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子16抗體 規(guī)格 0.2ml | PARP： 多腺苷二0酸多聚酶抗體(N端) 0.1ml |
Anti-NPY2R/FITC 熒光素標(biāo)記肽Y受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | FAST kinase(Fas-activated serine/threonine kinase) Fas活化的絲/蘇酸激酶抗原 0.5mg |
IgA/Gold 金標(biāo)記兔抗人IgA(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5ml | 7-Mar： 膜相關(guān)環(huán)指蛋白7抗體 0.1ml |
CD8B Others Human 人 CD8B / P37 / LEU2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;PUMC-HUVEC-T1 人膀胱成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
人角膜上皮細(xì)胞RNAHCEpiC miRNA5 μg | EGF Others Mouse 小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
hMo-PB-c single donorpre-screened 外周血來(lái)源的人類單核細(xì)胞，單一來(lái)源，預(yù)選型 10 million 人絨毛間充質(zhì)成纖維細(xì)胞HVMF | GPC3 Others Mouse 小鼠 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
Promocell C-27438 Adipocyte Nuition Medium, 脂肪細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基(即用型) 500ml | OP9小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 OP9 mouse bone marrow somal cells a-MEM培養(yǎng)基+20%FBS |
MDA-MB-231(ATCC來(lái)源), 人癌細(xì)胞 | 兔腸道干原代細(xì)胞PARP： 多腺苷二0酸多聚酶抗體(N端) 0.1ml |
人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞;CFPAC-1 大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 人結(jié)腸平滑肌細(xì)胞總RNAHCSMC NA |
大鼠輸尿管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | SERPINI1 Others Mouse 小鼠 SerpinI1 / Neuroserpin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
hCD34+-CB-c single donor 從臍帶血提取的人類CD34+祖細(xì)胞(hCD34+-CB)，單一來(lái)源 100000 人卵巢成纖維細(xì)胞HOF | Anti-IL-17/FITC 熒光素FITC標(biāo)記白介素-17抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-phospho-RUNX1/AML1(Ser249) 0酸化急性髓細(xì)胞白血病1蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | CL-0393NCI-H209(人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
Rhesus antibody Rh Phospho-p57 Kip2 (Thr310) 0酸化周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh Kinesin 驅(qū)動(dòng)蛋白KNS1抗體 規(guī)格 0.2ml |
IL-7(Rat Interleukin-7) ELISA kit 大鼠白介素7 96T | CD8B Others Human 人 CD8B / P37 / LEU2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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