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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10? |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | YS-01X8353 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔骨骼肌微血管內(nèi)皮采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法、專用培養(yǎng)基篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔骨骼肌微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔骨骼肌微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 骨骼肌 |
英文名稱 | Rabbit Skeletal Muscle Microvascular Endothelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X8353 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔骨骼肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長(zhǎng)柱形的多核細(xì)胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體支配下收縮或舒張，進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng)。微血管又稱毛細(xì)血管。分布于各種組織和細(xì)胞間的微細(xì)的血管。介于微動(dòng)脈和微靜脈之間。平均直徑7-9微米，數(shù)量極多，成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成，厚約0.5微米。基膜外面有薄層結(jié)締組織，其中有纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等。細(xì)的微血管由一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔，較粗的微血管由2-3個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成。分布于肌肉組織、組織和結(jié)締組織中的微血管，內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃），稱連續(xù)微血管。血管內(nèi)皮細(xì)胞在器官和組織的結(jié)構(gòu)和功能上起著非常重要的作用。并與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)。近年來血管內(nèi)皮細(xì)胞在炎癥、休克等一系列病理生理改變中的重要性愈來愈受到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn)，不同來源的內(nèi)皮細(xì)胞在生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)和功能等方面均存在一定差別，而同是微血管內(nèi)皮細(xì)胞，它們又存在器官和組織的特異性。骨骼肌組織是動(dòng)物體內(nèi)含量多的組織，肌肉組織供血豐富，是研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞功能和血管生成的理想靶組織。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔骨骼肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC | Anti-Tyk2/Non receptor tyrosine protein kinase 2 非受體酪蛋白激酶2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
CDK5(Human Cyclin Dependent Kinase 5) ELISA Kit 人周期素依賴性激酶5 96T | Anti-HSA/FITC 熒光素標(biāo)記鼠抗人血清白蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh thrombin II Ⅱ(II)抗體 規(guī)格 0.1ml | THP(Human T-H glycoprotein) ELISA Kit 人TH糖蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HSPABP/HIP/HSC70 Interacting Protein HIP： 熱休克蛋白70相互作用蛋白抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Catalase 酶抗體 規(guī)格 0.1ml |
FOXH1： 叉頭蛋白H1抗體 0.2ml | E2 ELISA Kit 大鼠雌二醇Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
CXCL16 Others Canine 狗 CXCL16 / SR-PSOX 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CA9 Others Human 人 CAIX / CA9 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人滑膜細(xì)胞總RNAHS NA | EREG Others Mouse 小鼠 EREG / epiregulin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
MPC-11(小鼠漿細(xì)胞瘤) 5×106cells/瓶×2 BALB/3T3(BALB/C小鼠胚成纖維細(xì)胞) | GKN1 Others Human 人 GKN1 / Gasokine 1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
KIT Others Human 人 c-KIT / CD117 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | Romas(人淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 WI-38(體胚肺細(xì)胞) |
Hep-2, 人喉癌細(xì)胞系 | 兔骨骼肌微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞THP(Human T-H glycoprotein) ELISA Kit 人TH糖蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
CD1d1 Others Mouse 小鼠 CD1D / R3G1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 人肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Tca-8113(人舌鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | L1210小鼠白血病細(xì)胞 L1210 mouse leukemia cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS |
IGFBP5 Others Canine 狗 IGFBP5 / IGFBP-5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | Anti-RAM-11/FITC 熒光素標(biāo)記抗RAM-11抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
2-Oct： 陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體 0.1ml | CD226 Others Mouse 小鼠 DNAM-1 / CD226 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
SORCS1： 液泡蛋白分選受體SORCS抗體 0.2ml | phospho-CSF2RB (Tyr766)： 0酸化粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體β抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml | CXCL16 Others Canine 狗 CXCL16 / SR-PSOX 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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