兔皮脂腺原代細(xì)胞

兔皮脂腺原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代表皮角質(zhì)形成細(xì)胞 木瓜蛋白酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL 腦動脈血管平滑肌細(xì)胞 AsPC-1 人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞 HEC-1A, 人內(nèi)膜癌細(xì)胞系 Human 豬原代成骨細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔皮脂腺采用蛋白酶聯(lián)合機(jī)械分離制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的兔皮脂腺經(jīng)CK4免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡介：

兔皮脂腺細(xì)胞分離自皮脂腺組織；皮脂腺是由腺泡與短的導(dǎo)管構(gòu)成的全漿分泌腺，皮脂腺導(dǎo)管開口于毛囊。除手外的其余部位皮膚中均有皮脂腺，前額、鼻、背上部的皮脂腺多，稱為皮脂溢出部位。其余的部位比較少，掌、足趾及足背沒有皮脂腺。皮脂腺大多位于毛囊及立毛肌之間，由一個或幾個囊狀的腺泡與一個共同的短導(dǎo)管構(gòu)成。分泌部呈囊泡狀，由多層腺細(xì)胞構(gòu)成。腺泡周邊緊貼基膜的細(xì)胞較小，呈扁平或立方形，稱為基細(xì)胞。新生的腺細(xì)胞不斷向中心移動，體積增加，胞質(zhì)內(nèi)的小脂滴越來越多，腺泡中心的細(xì)胞更大，細(xì)胞核固縮、細(xì)胞器消失，胞質(zhì)內(nèi)充滿脂滴。后腺細(xì)胞解體并與脂滴同時排出，即為皮脂。皮脂腺的分泌因人種、年齡、性別及氣候等因素而不同。10歲以前分泌力弱，16～35歲分泌旺盛，老年期減弱；夏天分泌旺盛，秋冬季分泌較少；過食油膩、辛辣刺激的食物以及按摩也可增加分泌。皮脂腺分泌旺盛，可導(dǎo)致皮膚油膩、皮膚粗糙、毛孔粗大，容易發(fā)生粉刺及脂溢性皮炎。皮脂腺，分泌皮脂過少，可導(dǎo)致皮膚干燥、脫屑、皮膚老化等，所以控制皮脂腺的分泌很關(guān)鍵。皮脂腺的活動也與多種皮膚疾病相關(guān)，例如: 皮脂腺數(shù)量或其活動的減少可能會導(dǎo)致皮膚干燥綜合征，特應(yīng)性皮炎是皮膚屏障功能障礙的炎癥性疾病，研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)病與皮脂腺功能減弱有關(guān) ，毛周角化病的皮損中則沒有皮脂腺。而皮脂分泌過多和尋常痤瘡相關(guān)。同時現(xiàn)有研究分析結(jié)構(gòu)化數(shù)據(jù)特征， 嘗試探索皮脂腺與皮脂腺腫瘤發(fā)生的聯(lián)系。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、Hydrocortisone、腎上腺素、甲狀腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔皮脂腺細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品：