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詳細(xì)介紹
兔腮腺原代細(xì)胞
兔腮腺細(xì)胞分離自腮腺組織；腮腺是哺乳類動(dòng)物口腔中位于下頜角處的大唾液腺，位于外耳道的前下方，下頜后窩內(nèi)及下頜支的深面。腮腺也是某些無尾目動(dòng)物頸部有毒皮膚腺的聚集體；唾液腺有3對(duì)，腮腺、舌下腺和頜下腺，其中大的一對(duì)是腮腺。腮腺細(xì)胞是高度分化的上皮源性細(xì)胞，是一種營(yíng)養(yǎng)需要復(fù)雜、在一般合成培養(yǎng)基中不易生長(zhǎng)，體外培養(yǎng)比較困難。目前，DMEM培養(yǎng)液被認(rèn)為較適于腺細(xì)胞的培養(yǎng)。加入一定量的血清更有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖與分化。另外，接種的細(xì)胞密度也是培養(yǎng)成功的關(guān)鍵因素之一，尤其是在腺細(xì)胞這種單層細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，接種的細(xì)胞總數(shù)量和生長(zhǎng)基質(zhì)表面的細(xì)胞密度對(duì)整個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)均有影響。
英文名稱 | Rabbit Parotid Gland Cells | 組織來源 | 腮腺 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8420 |
細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔腮腺細(xì)胞
組織來源：腮腺
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔腮腺細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腮腺采用膠原酶-聯(lián)合消化后差速貼壁，結(jié)合上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腮腺經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
小鼠垂體細(xì)胞MPC | FAM46C蛋白抗體 |
G蛋白γ5/Gγ5 抗體 | 酸化自噬相關(guān)蛋白7抗體 |
腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1、2、3、4抗體 | Fas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 |
腺苷酸環(huán)化酶5抗體 | FAM46C蛋白抗體 |
Fas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 | 酸化自噬相關(guān)蛋白7抗體 |
EPHA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 EphA4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 人胚肝二倍體細(xì)胞;CCC-HEL-1 人支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
人肺支氣管癌細(xì)胞;NCI-H1650 | CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
DPP7 Others Human 人 DPPII 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CD68 Others Rat 大鼠 CD68 / Macrosialin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人心肌細(xì)胞 (HCM) (1×106 ) HET-1A, 人食管上皮細(xì)胞 Human | HUASMC Pellet 人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人前列腺上皮細(xì)胞裂解物HPEpiCL |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;HH-01 | 兔腮腺原代細(xì)胞Fas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 |
TNFRSF8 Others Human 人 CD30 / TNFRSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 豬腎細(xì)胞;LLC-PK1 |
恒河猴腎細(xì)胞;LLC-MK2 | 非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO 胚絨毛癌細(xì)胞，JAR細(xì)胞 SW480 [SW-480](結(jié)腸癌細(xì)胞) |
EPHA4 Others Human 人 EphA4 / HEK8 (aa 570-986) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 肌肉果糖二酸酶抗體 |
腺苷酸環(huán)化酶5抗體 | HA Others H8N4 甲型流感 H8N4 (A/piail duck/Alberta/114/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
G蛋白γ5/Gγ5 抗體 | 腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1、2、3、4抗體 |
肌肉果糖二酸酶抗體 | EPHA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 EphA4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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