詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔視網(wǎng)膜Muller采用膠原酶消化法和反復(fù)消化法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔視網(wǎng)膜Muller經(jīng)GS免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔視網(wǎng)膜Muller原代細(xì)胞 | 組織來源 | 視網(wǎng)膜 |
英文名稱 | Rabbit Retinal Muller Cells | 貨號(hào) | YS-01X7865 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
兔視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織;視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成,兩層間在病理情況下可分開,稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連,由色素上皮細(xì)胞組成,它們具有支持和營(yíng)養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層,由外向內(nèi)分別為:色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、節(jié)細(xì)胞層、纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜,有感光作用;后部鼻側(cè)有一視乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個(gè)元組成。第一元是視細(xì)胞層,專司感光,它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上,而視錐細(xì)胞則在中心凹處多。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞,約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個(gè)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系,負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層,專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu),它貼于眼球的后壁部,傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動(dòng)的纖維跨越視網(wǎng)膜表面,經(jīng)由視到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,在黃斑區(qū),其分辨能力強(qiáng)。視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞作為視網(wǎng)膜中的主要膠質(zhì)細(xì)胞,大約占視網(wǎng)膜膠質(zhì)細(xì)胞的90%,因而在視網(wǎng)膜疾病中起著何種作用也受到越來越多的關(guān)注。在超微結(jié)構(gòu)水平上,Muller細(xì)胞的胞質(zhì)似乎比臨近的其他細(xì)胞更高的電子密度,更發(fā)達(dá)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng),細(xì)胞核是典型的卵圓形或多角形。但在不同物種中或同一物種中的不同部位,Muller細(xì)胞形態(tài)也會(huì)有所差異的。視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞是一種特化的膠質(zhì)細(xì)胞,不僅具有維持視網(wǎng)膜的正常結(jié)構(gòu)和功能的作用,并調(diào)制視網(wǎng)膜元活動(dòng),還能參與多種病理過程,尤其是眼底增殖性病變,如增生性體視網(wǎng)膜病變、增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變等,體外培養(yǎng)Muller細(xì)胞是研究這些增殖性病變途徑之一。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):梭形、多角形
傳代特性:可傳2-3代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
小鼠T淋巴細(xì)胞;Cl.Ly1+2-/9 | 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白FGGY抗體 |
膠漿成熟因子γ/GMF-γ抗體 | 腺苷酸環(huán)化酶1抗體 |
腺相關(guān)病毒5 VP1抗體 | 精神發(fā)育遲滯相關(guān)蛋白抗體 |
自噬相關(guān)蛋白18抗體 | 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白FGGY抗體 |
精神發(fā)育遲滯相關(guān)蛋白抗體 | 腺苷酸環(huán)化酶1抗體 |
EPHB1 Others Human 人 EphB1 / EPHT2 (aa 565-984) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 人癌細(xì)胞;MDA-MB-231 人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
人肺泡上皮細(xì)胞cDNAHPAEpiC cDNA | SELP Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
U14-GFP(小鼠子細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 SW 1088[SW-1088; SW1088](人腦星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞) | CRP Others Human 人 CRP / C-Reactive Protein 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 CD8B / P37 / LEU2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | RSPO1 Others Mouse 小鼠 R-Spondin 1 / RSPO1 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
CM-R121大鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔視網(wǎng)膜Muller原代細(xì)胞精神發(fā)育遲滯相關(guān)蛋白抗體 |
Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 (aa 1-725) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CRFK(貓腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WML6.0 | ACVR2A Others Mouse 小鼠 ACVR2A / AcIIa 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
TE-1人食管癌細(xì)胞 Human esophageal cancer cell line TE-1. RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS | 巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶6抗體 |
自噬相關(guān)蛋白18抗體 | TNFSF4 Others Cynomolgus 食蟹猴 OX-40L / TNFSF4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
膠漿成熟因子γ/GMF-γ抗體 | 腺相關(guān)病毒5 VP1抗體 |
巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶6抗體 | EPHB1 Others Human 人 EphB1 / EPHT2 (aa 565-984) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |