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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔胃黏膜上皮采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔胃黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔胃黏膜上皮原代細胞 | 組織來源 | 胃 |
英文名稱 | Rabbit Gastric Mucosal Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X8448 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔胃黏膜上皮細胞分離自胃黏膜組織；胃黏膜柔軟，活體呈橘紅色。胃空虛時形成許多皺襞，充盈時變平坦。幽門處的黏膜形成環(huán)形皺襞，突向腔內(nèi)稱幽門瓣。胃黏膜可分為三層，即上皮層（單層柱狀上皮）、固有層（由結締組織構成、含有大量的胃腺）和黏膜肌層（為薄層平滑肌、排列成內(nèi)環(huán)外縱）。胃黏膜上皮細胞源自胃黏膜的上皮層，細胞為單層柱狀上皮，排列整齊，能分泌黏液覆蓋于胃黏膜的表面，防止胃酸和對胃黏膜的損害。體外培養(yǎng)胃黏膜上皮細胞為研究細胞功能及致病因子、藥物、激素對細胞的損傷、保護和功能調(diào)控提供了簡單而的模型。
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔胃黏膜上皮細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
小梁網(wǎng)細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 白細胞介素6受體α抗體IL-6Rα |
ATP酶鈣離子轉運蛋白PMCA3抗體 | 周期蛋白結合蛋白抗體 |
卷曲蛋白8抗體 | 原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體 |
巨噬細胞炎性蛋白15 | 轉錄因子EYA1抗體 |
2號染色體開放閱讀框56抗體 | 透明質(zhì)酸及粘蛋白2抗體 |
MZB1 Others Human 人 MZB1 / PERP1 人細胞裂解液 (陽性對照) | A-427(人肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠T淋巴細胞;Cl.Ly1+2-/9 |
人肺動脈內(nèi)皮細胞總RNAHPAEC NA | 小鼠周成纖維細胞(MPNF)(5×105) |
OPCML Others Human 人 OPCML 人細胞裂解液 (陽性對照) | LRP10 Others Human 人 LRP10 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CSF1R Others Human 人 M-CSFR 人細胞裂解液 (陽性對照) | 小耳豬肺細胞;SEP-L1 癌細胞，MDA-MB-435S細胞 MA891細胞，小鼠癌細胞 |
CM-R100大鼠腦動脈血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基100mL | 兔胃黏膜上皮原代細胞原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體 |
786-O人腎透明細胞腺癌細胞 786-O human renal clear cell adenocarcinoma cells 1640+10% FBS | 人淋巴成纖維細胞總RNAHLF NA |
白鰱尾鰭細胞系;SCF | STX7 Others Human 人 STX7 / Syaxin 7 人細胞裂解液 (陽性對照) |
IMR-32(人母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 人前列腺癌細胞;LNCaP | 間隙連接蛋白30抗體 |
LHX5蛋白抗體 | CHO-pt細胞，轉血小板基因倉鼠卵巢細胞 L6(大鼠成肌細胞) 615小鼠癌瘤株;Ca761 |
BXDC1蛋白抗體 | 腫瘤抑制基因抗體 |
綠色熒光蛋白（免疫組化用抗體） | MZB1 Others Human 人 MZB1 / PERP1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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