詳細介紹
兔胰腺星狀原代細胞
兔胰腺星狀細胞分離自胰腺組織;胰腺分為外分泌腺和內分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原、脂肪酶、等。胰液通過胰腺管排入十二指腸,有消化蛋白質、脂肪和糖的作用。內分泌腺由大小不同的細胞團──胰島所組成,胰島主要由4種細胞組成:α細胞、β細胞、γ細胞及PP細胞。α細胞分泌胰高血糖素,升高血糖;β細胞分泌胰島素,降低血糖;γ細胞分泌,以旁分泌的方式抑制α、β細胞的分泌;PP細胞分泌胰多肽,抑制胃腸運動、胰液分泌和膽囊收縮。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征,活化的胰腺星狀細胞(PSC)是胰腺纖維化的主要效應細胞,PSC分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴,并表達Desmin蛋白,活化后的PSC則表達α-平滑肌肌動蛋白(alpha-SMA)。PSC具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種,并分別具有特異的標志物。靜息狀態(tài)PSC胞質內富含的A脂滴可以被油紅O染成紅色,陽性表達Desmin。激活狀態(tài)PSC陽性表達alpha-SMA。油紅O染色發(fā)現(xiàn),原代分離的細胞培養(yǎng)6d,胞漿中仍可見明顯的脂滴,傳代后,橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失。免疫細胞化學染色顯示,細胞接種24h仍然表達Desmin,48h后Desmin基本不再表達。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細胞開始表達alpha-SMA,隨著培養(yǎng)時間的增長和傳代次數(shù)的增加,細胞表達alpha-SMA,而不再表達Desmin,說明細胞活化。提示PSC接種24h后即啟動了激活過程,至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細胞激活,傳代后細胞處于高度激活狀態(tài)。原代胰腺星狀細胞可作為慢性胰腺炎新藥的細胞篩選模型,目前研究發(fā)現(xiàn):胰腺受損時,在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細胞活化,導致細胞形態(tài)、功能發(fā)生變化,促使基質增生、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積。
英文名稱 | Rabbit Pancreatic Stellate Cells | 組織來源 | 胰腺組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7192 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:兔胰腺星狀細胞
組織來源:胰腺組織
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3-5代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
方法簡介
公司實驗室分離的兔胰腺星狀采用膠原酶消化法制備而來制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的兔胰腺星狀經(jīng)α-SMA、Desmin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
猴脈絡膜-視網(wǎng)膜(內皮)細胞;RF/6A | 骨髓基質干細胞抗原1抗體 |
Ras相關GTP結合蛋白抗體 | 細胞分裂核仁蛋白1抗體 |
酸化組蛋白去乙酰化酶4抗體 | 彈性蛋白結合蛋白Fcn2抗體 |
蛇毒巴曲酶抗體 | 帕金蛋白抗體 |
鋅指蛋白201抗體 | 肌側索硬化2染色體區(qū)域候選蛋白8抗體 |
HNE2, 人鼻咽癌細胞系 | NCI-H446 人小細胞肺癌細胞 |
hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細胞 | 人臍動脈平滑肌細胞 |
大鼠腹脊髓元RN-vsc | HuTu-80(人十二脂腸腺癌) 5×106cells/瓶×2 |
NIH3T3 小鼠胚胎成纖維細胞 | 人腦血管周細胞cDNAHBVP cDNA |
JEG細胞,人絨毛膜癌 大鼠肝細胞,IAR20細胞 人心臟成纖維細胞-心房HCF-aa | 兔胰腺星狀原代細胞彈性蛋白結合蛋白Fcn2抗體 |
人惡性黑色素瘤細胞;A-375 [A375] | DPP4 Others Human 人 DPPIV / DPP4 / CD26 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人卵巢成纖維細胞(HOF) ( 5×105 ) | CM-M031小鼠腸動脈內皮細胞培養(yǎng)基100mL |
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMYF | 原誘導蛋白2抗體 |
紡錘體檢查點蛋白抗體 | 小鼠原B細胞株;BaF3 |
異戊烯半羧基甲基轉移酶抗體 | 白細胞介素-13受體a1抗體 |
卡因和他明調節(jié)轉錄蛋白抗體 | HNE2, 人鼻咽癌細胞系 |
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。