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?小鼠骨骼肌微血管內(nèi)皮原代細胞
小鼠骨骼肌微血管內(nèi)皮細胞分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長柱形的多核細胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體支配下收縮或舒張，進行隨意運動。微血管又稱毛細血管。分布于各種組織和細胞間的微細的血管。介于微動脈和微靜脈之間。平均直徑7-9微米，數(shù)量極多，成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細胞及一薄層基膜組成，厚約0.5微米?；ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織，其中有纖維細胞、巨噬細胞和周細胞等。細的微血管由一個內(nèi)皮細胞圍成管腔，較粗的微血管由2-3個內(nèi)皮細胞圍成。分布于肌肉組織、組織和結(jié)締組織中的微血管，內(nèi)皮細胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃），稱連續(xù)微血管。血管內(nèi)皮細胞在器官和組織的結(jié)構(gòu)和功能上起著非常重要的作用。并與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)。近年來血管內(nèi)皮細胞在炎癥、休克等一系列病理生理改變中的重要性愈來愈受到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn)，不同來源的內(nèi)皮細胞在生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)和功能等方面均存在一定差別，而同是微血管內(nèi)皮細胞，它們又存在器官和組織的特異性。骨骼肌組織是動物體內(nèi)含量多的組織，肌肉組織供血豐富，是研究內(nèi)皮細胞功能和血管生成的理想靶組織。
英文名稱 | Mouse Skeletal Muscle Microvascular Endothelial Cells | 組織來源 | 骨骼肌 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8497 |
細胞形態(tài) | 內(nèi)皮細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：小鼠骨骼肌微血管內(nèi)皮細胞
組織來源：骨骼肌
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠骨骼肌微血管內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的小鼠骨骼肌微血管內(nèi)皮采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法、專用培養(yǎng)基篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的小鼠骨骼肌微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞 | 果糖1，6-二酸酯酶抗體 |
RNA結(jié)合蛋白26抗體 | 細胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 |
0脂?；嫉鞍拙厶?span>-5抗體 | 蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體 |
內(nèi)分泌特異性蛋白2抗體 | 破傷風(fēng)毒素重鏈抗體 |
鋅指蛋白754抗體 | 基質(zhì)金屬蛋白酶20抗體 |
THPO Protein Human 重組人 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標(biāo)簽) | 小鼠樹突狀細胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);DG6-GFP |
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞;PUMC-mips-B5 I型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL | Saos-2，人成骨肉瘤細胞 Human |
小鼠腎動脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基 100mL | IL23 Protein Mouse 重組小鼠 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白 |
NCI-H1650 人非小細胞肺癌細胞 | 小鼠外周血白細胞培養(yǎng)基 100mL |
WEHI-231小鼠B淋巴細胞 WEHI-231 B lymphocyte in mice DMEM+10% FBS+0.05mM β-Mercaptoethanol | 小鼠骨骼肌微血管內(nèi)皮細胞蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體 |
人胚腎細胞;293 [HEK-293] | A875(人黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠腎集合管細胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-1 |
DAPK1 Others Human 人 DAPK1 / DAP Kinase 1 (aa 1-363) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | CM-M060小鼠腎動脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基100mL |
Ca Ski(人上皮細胞) 5×106cells/瓶×2 | 酸性酸酶抗體 |
分選連接蛋白2抗體 | 大耳山羊腎細胞;LDG-2 |
抑制素結(jié)合蛋白抗體 | 半雙加氧酶1抗體 |
跨膜TMIGD1蛋白抗體 | THPO Protein Human 重組人 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
小鼠骨骼肌微血管內(nèi)皮原代細胞
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