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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠頸動(dòng)脈血管平滑肌采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠頸動(dòng)脈血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠頸動(dòng)脈血管平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 動(dòng)脈 |
英文名稱 | Mouse Carotid Artery Vascular Smooth Muscle Cells | 貨號(hào) | YS-01X8507 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠頸動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自頸動(dòng)脈組織；頸動(dòng)脈存在于脊椎動(dòng)物頸部的動(dòng)脈。有頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈。前者分布至頭頂部和顏面部。后者進(jìn)入顱內(nèi)分布至腦和眼眶內(nèi)。在發(fā)生時(shí)，鰓弓中不形成鰓的下頜弓，所以，從大動(dòng)脈也不分入鰓動(dòng)脈和出鰓動(dòng)脈。從腹大動(dòng)脈的前方發(fā)出頸外動(dòng)脈，頸內(nèi)動(dòng)脈是通向第三鰓弓的血管延伸而形成的，但在某些魚類、有尾兩棲類和爬行類中，這一血管也將一些血液送至大動(dòng)脈根。其它的高等脊椎動(dòng)物的大動(dòng)脈根，在第三、第四大動(dòng)脈弓之間消失，所以，其第三大動(dòng)脈弓形成純粹的頸動(dòng)脈。在相當(dāng)于第三、第四大動(dòng)脈弓之間的腹行大動(dòng)脈的部分稱為頸總動(dòng)脈干（common co-rotid trunk）；高等脊椎動(dòng)物，是由頸總動(dòng)脈干分為左、右頸總動(dòng)脈，然后再各分支為頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈。頸動(dòng)脈是將血液由心臟輸送至頭、面、頸部的大血管，是腦的主要供血血管之一，由內(nèi)膜、平滑肌層及外膜層構(gòu)成。與其相關(guān)常見疾病為頸動(dòng)脈狹窄，頸動(dòng)脈狹窄導(dǎo)致的缺血癥狀主要包括，頭暈、記憶力、定向力減退、意識(shí)障礙、黑朦、偏側(cè)面部和/或肢體麻木和/或無(wú)力、伸舌偏向、言語(yǔ)不利、不能聽懂別人說(shuō)的話等。研究頸動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的體外培養(yǎng)，為研究治療頸動(dòng)脈狹窄提供一個(gè)細(xì)胞模型具有重要意義。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠頸動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
腎皮層上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | RAN結(jié)合蛋白7抗體 |
原鈣粘蛋白γB5抗體 | 細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)蛋白NALP3抗體 |
FXYD離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子6抗體 | 酸化原癌基因c-Met相關(guān)酪激酶抗體 |
細(xì)胞質(zhì)多聚腺苷酸結(jié)合蛋白1抗體 | 原活化蛋白激酶酸酶-1抗體 |
1號(hào)染色體開放閱讀框113抗體 | 皰疹病毒相關(guān)泛素特異7抗體 |
NRG1 Others Human 人 NRG1-beta 1 (ECD) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | COLO 205(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0158MGC80-3(人胃癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠肝細(xì)胞;BRL |
人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WPS1 | TNFRSF9 Others Mouse 小鼠 4-1BB / TNFRSF9 / CD137 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
hMoCD14+-PB single donorpre-screened Pellet 人類外周血CD14+單核細(xì)胞團(tuán)塊單一來(lái)源，預(yù)選型 > 1 mio.cells 人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞RNAHA-sp miRNA5 μg | KIAA1279 Others Human 人 KIAA1279 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
CADM3 Others Mouse 小鼠 CADM3 / IGSF4B / NECL1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | TNFRSF10B Others Human 人 TNFRSF10B / AILR2 / CD262 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
CM-M010小鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠頸動(dòng)脈血管平滑肌原代細(xì)胞酸化原癌基因c-Met相關(guān)酪激酶抗體 |
人成骨肉瘤細(xì)胞;MG-63 大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | MPC-83 胰腺腺泡細(xì)胞癌 |
小鼠前胃癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);MFC-B5-GFP | 4T1小鼠癌細(xì)胞 Mouse breast cancer cell 4T1 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS |
NFASC Others Human 人 NFASC / Neurofascin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 11號(hào)染色體開放閱讀框65抗體 |
15抗體 | EFNA5 Others Human 人 EphrinA5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
酸化乳腺癌易感基因1抗體 | 外營(yíng)養(yǎng)蛋白2抗體 |
G氨基A型受體α4/GABAA Rα4抗體 | NRG1 Others Human 人 NRG1-beta 1 (ECD) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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