小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體原代細(xì)胞

小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代冠狀動脈成纖維細(xì)胞 NCI-H446(人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) H1299 人肺癌細(xì)胞 1ml/T75 U266B1 [U266], 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 Human RWPE-1 人正常前列腺上皮細(xì)胞 大鼠原代外周血白細(xì)胞

小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體原代細(xì)胞

小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞系統(tǒng)，在銀浸染標(biāo)本中，少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞。少突膠質(zhì)細(xì)胞（oligodendrocyte）是中樞系統(tǒng)（CNS）的成髓鞘膠質(zhì)細(xì)胞，其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、前少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞等階段。有學(xué)者將少突膠質(zhì)細(xì)胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型。但是，細(xì)胞發(fā)育是一個連續(xù)的過程，其形態(tài)、表達(dá)產(chǎn)物和功能的演變沒有嚴(yán)格的界限，因此，其分類是相對的。這三型分別為：Ⅰ型少突膠質(zhì)細(xì)胞又稱前O2A（pre-O2A progenitor cell）。細(xì)胞呈圓形，表面光滑，直徑約3μm，體外混合培養(yǎng)時成簇生長在星形膠質(zhì)表面，具有很強(qiáng)的分裂增殖潛力，表達(dá)節(jié)苷脂GM1、波形蛋白和多唾液酸—粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule，PSA-NCAM）等。Ⅱ型少突膠質(zhì)細(xì)胞胞體常有雙極或三極突起，極少數(shù)為單極突起，直徑約7μm，有一定的分裂增殖能力。體外培養(yǎng)時為雙潛能細(xì)胞，既可分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì)，故又稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細(xì)胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell，O2A）。O2A除表達(dá)GM1和波形蛋白外還表達(dá)節(jié)苷脂GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體），故常用A2B5抗體標(biāo)記O2A。Ⅲ型少突膠質(zhì)細(xì)胞不再具有分裂增殖能力，為分裂終期細(xì)胞。直徑約10μm。根據(jù)其形成髓鞘的能力，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質(zhì)細(xì)胞。不成熟的OL胞體常伸出4～5條較粗大突起，表面還殘留有A2B5標(biāo)記物，同時也表達(dá)O1-O4抗原，無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞突起有如蜘蛛網(wǎng)，大量表達(dá)半乳糖腦苷脂（galactocerebro side，GC）、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein，PLP）、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）等，有對軸突髓鞘化的能力。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞（簡稱少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞，前兩者具有增殖能力。

產(chǎn)品名稱：小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞

組織來源：腦組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2天半量換液1次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 雙極、多極形

傳代特性 不傳代，不增值，存活1-2周

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的小鼠少突膠質(zhì)采用消化、混合細(xì)胞營養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠少突膠質(zhì)前體經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

 

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。