詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
?方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠羊膜胚胎采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠羊膜胚胎經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 小鼠羊膜胚胎原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 胎盤(pán)組織 |
英文名稱(chēng) | Mouse Amniotic Embryonic Cells | 貨號(hào) | YS-01X7678 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠胚胎羊膜細(xì)胞分離自羊膜組織;羊膜為單層上皮細(xì)胞互相連接構(gòu)成的薄膜。單層上皮細(xì)胞具有分泌羊水的作用。隨著胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育,羊膜與絨毛密切緊貼,形成胎膜。胎膜隨著羊膜腔逐漸擴(kuò)大而呈半透明的薄膜,無(wú)血管,富有韌性(胎膜也就是羊膜腔的囊壁)。羊膜腔內(nèi)充滿的液體為羊水。羊膜僅覆蓋在胎盤(pán)的兒體面,并不深入胎盤(pán)組織中,隨著妊娠的進(jìn)展羊膜腔逐漸擴(kuò)大,占據(jù)整個(gè)子宮腔,羊膜是胎膜內(nèi)一層,是一層半透明的薄膜,與覆蓋在胎盤(pán)、臍帶的羊膜層相連接。羊膜是胎盤(pán)的內(nèi)層,與人眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,含有眼表上皮細(xì)胞,包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的物質(zhì),其光滑,無(wú)血管、及淋巴,具有一定的彈性,厚0.02~0.5mm,在電鏡下,其分為五層:上皮層、基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層,羊膜基底膜和羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,主要為i、iii、iv、v、vii型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份,正是這些成份使羊膜可以充當(dāng)“移植的基底膜"而發(fā)揮一種新的健康合適的基質(zhì)。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成,均具有多分化潛能,可轉(zhuǎn)化為元,且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)因子的功能。
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
操作步驟:
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
人真皮淋巴內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HDLECL | 集成復(fù)雜蛋白亞單位3抗體 |
蛋白酸酶2C抗體 | 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框83抗體 |
酸化酪蛋白激酶A2受體抗體 | 酸化蛋白激酶MST1抗體 |
22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框32抗體 | 二肽基肽酶8抗體 |
20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框20抗體 | 類(lèi)狀瘤病毒33抗體 |
GFRA1 Others Rat 大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | HCF-c 人類(lèi)的心臟成纖維細(xì)胞(HCF) 500,000cells 元細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) |
腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | IB2 Others Human 人 IB2 / B2 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
IL2RG Others Mouse 小鼠 IL2RG 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | NGFR Others Human 人 NGFR/ P75 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
GLA Others Human 人 GLA / Alpha-galactosidase A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 豬源細(xì)胞 皮膚細(xì)胞,CCD-1095Sk細(xì)胞 ZM755細(xì)胞,615小鼠滑膜肉瘤瘤株 |
CM-H003人肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠羊膜胚胎原代細(xì)胞酸化蛋白激酶MST1抗體 |
786-O細(xì)胞,人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞 小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞,CMT93細(xì)胞 CL-0202Saos-2(人骨肉瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人尿道上皮細(xì)胞RNAHUC miRNA5 μg |
CM-R022大鼠甲狀腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | C6 Others Human 人 C6 / compleme compone 6 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
PDPN Others Human 人 PDPN / Podoplanin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CD73抗體 |
鉀離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體 | Ca Ski, 人細(xì)胞 非洲綠猴腎細(xì)胞,CV-1(M)細(xì)胞 PA-1(人卵巢畸胎瘤細(xì)胞) |
整合素樣金屬蛋白酶與樣4蛋白抗體 | γ-分泌酶組件蛋白NCLN抗體 |
生發(fā)中心相關(guān)核蛋白MCM3抗體 | GFRA1 Others Rat 大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |