詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠陰道壁成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠陰道壁成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠陰道壁成纖維原代細(xì)胞 | 組織來源 | 陰道組織 |
英文名稱 | Mouse Vaginal Wall Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X7736 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介:
小鼠陰道壁成纖維細(xì)胞分離自陰道組織;陰道位于膀胱、尿道和直腸之間,是一個(gè)富有彈性的管狀器官。它在人類生殖過程中具有多種生理功能,是連接子宮與外陰的通道,是排出月經(jīng)血、娩出嬰兒的必經(jīng)之路,也是一個(gè)重要的性交器官。陰道壁按組織學(xué)由外到內(nèi)分三層,即黏膜層、肌層和外膜。1)黏膜層由上皮和固有膜組成。上皮較厚,為復(fù)層鱗狀上皮,從基底層到表層由基底層、旁基底層、中間層和表層組成。沒有角化層。陰道粘膜的基底層呈細(xì)波紋狀起伏。2)肌層由平滑肌組織構(gòu)成,肌束排列不規(guī)則,縱行和環(huán)形互相交錯(cuò)。肌束間有較多的結(jié)締組織和彈性纖維。陰道外口有環(huán)形的橫紋肌稱括約肌。3)外膜層為纖維膜,由結(jié)締組織構(gòu)成,內(nèi)含豐富的彈性纖維、靜脈叢、淋巴管和。大鼠陰道壁成纖維細(xì)胞主要分離自外膜層,成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代左右;2代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
人真皮成纖維細(xì)胞-新生兒cDNAHDF-n cDNA | IQCA1蛋白抗體 |
酸肌醇0脂酶PLCZ1抗體 | 1號(hào)染色體開放閱讀框31抗體 |
轉(zhuǎn)錄因子E2F-4抗體 | 基質(zhì)金屬蛋白酶2抗體 |
CD27抗體 | 二氫嘧啶脫氫酶抗體 |
E3泛素蛋白連接酶CHIP蛋白抗體 | 植烷酰A羥化酶2抗體 |
NA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | LIFR Others Mouse 小鼠 LIFR / CD118 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | CTLA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 CTLA4 / CD152 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/goose/Guiyang/337/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | AACS Others Human 人 AACS / Acetoacetyl-CoA 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
ACVR2B Others Human 人 ACVR2B / ActivinR-IIB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | MBL1 Others Rat 大鼠 MBL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CL-0460U14-GFP(小鼠子細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 小鼠陰道壁成纖維原代細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2抗體 |
9. 腎臟細(xì)胞系統(tǒng) | MDK Protein Human 重組人 Midkine / MDK 蛋白 |
人導(dǎo)管瘤細(xì)胞;UACC812 | NOG Others Human 人 Noggin / NOG 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
正常小鼠Sertoli細(xì)胞;TM4 小鼠子宮平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 22號(hào)染色體開放閱讀框9抗體 |
細(xì)胞角膜蛋白多糖抗體 | CD81 Others Human 人 CD81 / TAPA-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
去整合素樣金屬蛋白酶20抗體 | 螺旋環(huán)螺旋蛋白1+2抗體 |
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白10抗體 | NA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |