詳細介紹
化學結構:
異硫氰酸熒光素酯(Fluorescein Isothiocyanate,F(xiàn)ITC)是一種常用的熒光標記試劑。
異硫氰酸熒光素酯具有良好的熒光特性和標記能力。
結構式:
基礎知識概述:
3326-32-7,F(xiàn)luorescein Isothiocyanate
中文名:異硫氰酸熒光素酯
英文名:Fluorescein Isothiocyanate
分子式:C21H11NO5S
分子量:389.38
規(guī)格標準:1mg、5mg、10mg
試劑廠家:陜西新研博美生物科技有限公司
相關應用:
生物分子標記:FITC的異硫氰酸基團可以與蛋白質(zhì)上的氨基、巰基、咪唑、酪氨酰、羰基等基團結合,用于標記抗體、凝集素等生物分子。標記后的抗體或蛋白質(zhì)仍保留其特異性,可用于免疫熒光、流式細胞術、免疫組化等檢測。
病原體檢測:通過標記抗體,F(xiàn)ITC可用于快速鑒定細菌、病毒或寄生蟲等病原體。
細胞與組織成像:可用于標記多糖、脂質(zhì)等,研究細胞吞噬、血管通透性及組織分布。
蛋白質(zhì)相互作用研究:通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)技術,F(xiàn)ITC可用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。
使用說明:
1. 標記反應
1) 取算好體積的新鮮配制的 50 μL FITC 緩慢加入到 1 mL 蛋白樣品溶液中,輕輕搖勻混合,然后短暫離心將樣品收集在反應管底部。切忌劇烈混勻,防止蛋白樣品變性失活。
2) 將該反應小管置于避光處,在室溫條件下輕輕搖晃孵育 8 h,每隔 30 分鐘,將反應小管輕輕顛倒幾次,以充分混合兩種反應物,提高標記效率。
3) 加入 5 M 的 NH4Cl 至終濃度 50 mM,4℃ 終止反應 2 h。
2. 蛋白純化脫鹽
以下方案以使用 Sephadex G-25 柱純化染料蛋白偶聯(lián)物為例。
1) 按照生產(chǎn)說明書制備 Sephadex G-25 柱。
2) 將反應混合物裝入Sephadex G-25 色譜柱頂部。
3) 當樣品運行到頂部樹脂表面下方時,立即加入 PBS (pH 7.2-7.4)。
4) 向所需樣品中加入更多的PBS (pH 7.2-7.4),完成柱純化。結合物含有所需要的染料-蛋白質(zhì)綴合物的組分。
注意事項:
純度標準95%+
保存建議:避免反復凍融,避光保存,儲液應該立即使用,任何未用的溶液分裝小份冷凍于 < -20°C
注意事項:僅用于科學研究
相關試劑(部分):
Fluorescein-peg3-(n-boc)-amine
Fluorescein-thiourea-PEG2-azide
6-Fluorescein dT phosphoramidite
5'-(5-Fluorescein) phosphoramidite
N-(Azido-PEG2)-N-Fluorescein-PEG3-acid
Fluorescein 6-isothiocyanate
Fluorescein Potassium Salt
Fluorescein dipropionate
Fluorescein-5-thiosemicarbazide
Fluorescein-thiourea-PEG6-acid
3326-32-7,F(xiàn)luorescein Isothiocyanate