化學試劑

氯霉素Chloramphenicol C11H12Cl2N2O5 CAS: 56-75-7

建議的內標：D5-氯霉素。

 

色譜分離流動相的制備：

1M 乙酸銨溶液：溶解 77g 乙酸銨于1L HPLC級的水中；

流動相A：在1L HPLC級的水中，加入1mL甲酸、5mL 1M 乙酸銨溶液；

流動相B：1L HPLC級的甲醇中，加入1mL甲酸、5mL 1M 乙酸銨溶液。

 

樣品制備(牛奶樣品)

基于Hormazabal等人提出的方法[1]：

1．量取2mL牛奶樣品；

2．加入100µL 內標溶(D5-氯霉素，1µg/mL)；

3．加入5mL乙腈提??；

4．4000r/min，離心10min；

5．用5mL氯fang清洗上清液；

6．4000r/min，離心10min；

7．棄去上層水相；

8．N2流保護下干燥下層；

9．將殘留物溶解于100µL 甲醇中；

10．加入3mL水、0.5mL 0.5mol/L的磷酸氫二鈉(pH=6.0)；

11．將溶液加入準備好的Bond Elute LMS固相提取柱；

12．分別用2mL水和0.3mL的水/甲醇沖洗；

13．用0.3mL甲醇進行洗脫，洗脫2次；

14．N2流保護下，55℃溫和加熱至干；

15．殘留物溶解于1mL的水中；

16．用0.45µm的濾膜進行過濾，備用。

 

樣品制備(奶粉樣品) 基于Hormazabal等人提出的方法[1]： 1．稱量5g奶粉； 2．加入100µL內標溶(D5-氯霉素，1µg/mL)； 3．加入25mL水進行稀釋； 4．Ultra Turrax 勻漿 1min； 5．繼續(xù)使用上面牛奶處理方法(第3～16步)。

 

樣品制備(蜂蜜樣品1)

基于Nieland 等人提出的方法[2]：

1．溶解5g蜂蜜于20mL水中；

2．加入100µL 內標溶 (D5-氯霉素,1µg/mL)；

3．混旋均勻；

4．20mL乙酸乙酯，超聲提取5min；

5．4000r/min，離心10min；

6．將上清液移入玻璃試管；

7．N2流保護下55℃溫和加熱至干；

8．用1mL水溶解殘留物；

9．用0.45µm的濾膜進行過濾，備用。

 

樣品制備(蜂蜜樣品2)

1．溶解10g蜂蜜于15mL水中；

2.．加入100µL內標溶 (D5-氯霉素,1µg/mL)；

3．加入Extrelut NT柱(柱容量20mL)；

4．靜置45min；

5．用40mL環(huán)己烷/乙酸乙酯(95/5)清洗2次；

6．用40mL環(huán)己烷/乙酸乙酯(50/50)洗脫2次，合并洗脫液；

7．用NaSO4干燥、過濾；

8．N2流保護下，55℃溫和加熱至干；

9．用1mL水溶解殘留物；

10．用0.45µm的濾膜進行過濾，備用。

 

樣品制備(果凍樣品)

1．稱量2g果凍；

2．加入100µL內標溶 (D5-氯霉素，1µg/mL)；

3．加入20g硅酸鎂載體(活化60～100Å孔徑)；

4．用玻璃棒勻漿；

5．準備一根5g硅酸鎂的玻璃柱；

6．將勻漿混合物上到玻璃柱上；

7．用250mL乙酸乙酯/環(huán)己烷(50/50)沖洗試管、玻棒、柱子；

8．N2流保護下55℃溫和加熱至干；

9．用1mL水溶解殘留物；

10．用0.45µm的濾膜進行過濾，備用。

 

 

樣品制備(魚、水產品)

基于Effkemann等人提出的方法[3]：

1．稱量5g魚或其他水產品的組織并勻漿；

2．加入100µL 內標溶 (D5-氯霉素，1µg/mL)；

3．加入10mL乙酸乙酯；

4．用Ultra Turrax勻漿1min；

5．3000r/min，離心10min；

6．將上清液移入玻璃試管；

7．N2流保護下，55℃溫和加熱至干；

8．用1mL水溶解殘留物；

9．加入1mL環(huán)己烷，混勻；

10．3000r/min，離心10min；

11．轉移下層水相到樣品管中，備用。

 

色譜分離條件

Agilent 1100 系統：G1312A二元泵系統、G1367A型自動進樣器、柱溫箱。

色譜柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱，50mm×2mm，4µm，80Å。

流動相：A相—水+0.1%甲酸+5mM乙酸銨；B相—甲醇+0.1%甲酸+5mM乙酸銨。

梯度設置：

 

AB液質聯用儀MS/MS 檢測