前言：丙po酚是一種鎮(zhèn)靜性催眠麻醉劑，常用于誘導全身麻醉。誘導麻醉的典型劑量約為2-2.5 mg/kg，而維持麻醉則需要約 0.2 mg/kg/h 的輸注。本應(yīng)用簡報描述了血清、全血、玻璃體液、尿液或組織勻漿的分析方法。分析中樣品的最少需要量為 1.0 mL。將生物樣品堿化至堿性 pH 值，用庚烷萃取，然后對丙po酚進行分離。

實驗部分標準品和試劑試劑 — 庚烷和氫氧化銨 — 試劑級。標準品 — 丙po酚 (P-076 1 mg/mL) 和丙po酚 d-17(P-077 100 mcg/mL) 內(nèi)標物購自Cerilliant。丙po酚儲備 QC 標準品 — (1 g - MP Biomedical) 用于制備溶于甲醇的 1 mg/mL 的工作 QC 標準品。碳酸鈉/碳酸氫鈉緩沖液 — pH = 9.8（將 100 g 碳酸鈉和 50 g 碳酸氫鈉混合于 1000 mL 去離子水中。通過逐滴加入 5 N 的 NaOH或 10% 磷酸將 pH 調(diào)至 9.8）。隨后制備工作標準品：丙po酚 — 10 µg/mL（在容量瓶中用甲醇將 0.1 mL 的 Cerilliant儲備液稀釋至 10 mL）。丙po酚 d-17 — 10 µg/mL（在容量瓶中用甲醇將 1.0 mL 的Cerilliant 儲備液稀釋至 10 mL）。丙po酚工作 QC 標準品 — 10 µg/mL（在容量瓶中用甲醇將 0.1 mL的 MP Biomedical 工作 QC 儲備液稀釋至 10 mL）。在 2-8 oC 下儲存所有標準品，穩(wěn)定期為 2 年。對照和校準標準品陰性對照 — 來自美國紅十字會的不含藥的全血，使用生理鹽水(0.9%) 按 1:2 稀釋，儲存于 -20 oC 下，可穩(wěn)定 1 年。低對照 — (0.25 µg/mL) 在 16 × 100 mm 螺口蓋培養(yǎng)管內(nèi)將 25 µL工作丙po酚 QC 標準品 (10 µg/mL) 加至 975 µL 的空白血液中。高對照 1 — (0.75 µg/mL) 在 16 × 100 mm 螺口蓋培養(yǎng)管內(nèi)將 75 µL工作丙po酚 QC 標準品 (10 µg/mL) 加至 925 µL 的空白血液中。高對照 2—(1.5 µg/mL）在 16 × 100mm螺口蓋培養(yǎng)管內(nèi)將 150 µL工作丙po酚 QC 標準品 (10 µg/mL) 加至 850 µL 的空白血液中。

樣品制備1. 使用如下在 16 × 100 mm 培養(yǎng)管中的工作標準品和不含藥的血液制作校準曲線：• 0.1 µg/mL-10 µL 標準品和 990 µL 血液• 0.2 µg/mL-20 µL 標準品和 980 µL 血液• 0.5 µg/mL-50 µL 標準品和 950 µL 血液• 1.0 µg/mL-100 µL 標準品和 900 µL 血液• 2.0 µg/mL-200 µL 標準品和 800 µL 血液2. 將 1 mL 樣品、陰性和陽性對照移取到帶標記的 16 × 100 mm螺口蓋培養(yǎng)管內(nèi)。3. 向各管內(nèi)加入 100 µL 工作內(nèi)標物。4. 加入 2 mL pH 11.0 的緩沖液。加入 0.5 mL 庚烷。5. 加蓋，渦旋（約 15 s）。6. 旋轉(zhuǎn) 15 min，然后在 3,000 rpm 下離心至少 10 min。7. 將約 200 µL 的庚烷層轉(zhuǎn)移入具有 300 µL 內(nèi)插管的 ALS 瓶內(nèi)。8. 壓合瓶蓋，轉(zhuǎn)至氣相質(zhì)譜進行分析。

結(jié)果與討論下列標準用于確定丙po酚是否存在以及其含量。• 色譜分析結(jié)果可被接受（峰分辨率、峰對稱性、不存在交叉污染）。• 存在可用來定量和定性的選擇性離子。• 離子比例處于校準確定的靶標值的 20% 以內(nèi)。• 來自測試標本的假定丙po酚的保留時間大約在最近一次校準保留時間的± 2% 以內(nèi)。

方法限使用丙po酚和內(nèi)標物定量離子的面積進行定量分析。通過比較未知物和對照物的相對響應(yīng)，并比較各校準物濃度的相對響應(yīng)而產(chǎn)生的校準曲線來實現(xiàn)定量。陽性對照必須處于其靶標范圍內(nèi)，陰性對照中不能有丙po酚的存在。線性 0.1–2.0 µg/mL檢測限 (LOD) 0.05 µg/mL定量限 (LOQ) 0.10 µg/mL交叉污染 在 2.0 µg/mL 的濃度測量值后未見交叉污染干擾物 未發(fā)現(xiàn)

結(jié)論本應(yīng)用簡報展示了一種使用丙po酚 d-17 作為內(nèi)標物測定生物樣品中丙po酚的靈敏且穩(wěn)定的選擇性方法。對于丙po酚的分析，氣相色譜四極桿離子阱串聯(lián)質(zhì)譜的優(yōu)勢不可低估。氣相色譜四極桿離阱串聯(lián)質(zhì)譜在減少樣品基質(zhì)干擾、改善信噪比以及兼具高選擇性和靈敏性方面，為丙po酚的分析提供了可信度更高的解決方案。氣相色譜四極桿離子阱串聯(lián)質(zhì)譜分析能夠減少假陽性和假陰性，還能在所得的結(jié)果中實現(xiàn)更高的可信度。使用上文所列的優(yōu)化方法，可將快速、靶向的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法用于解決當前法醫(yī)實驗室所面臨的丙po酚分析難題。聯(lián)合使用三種陽性對照與陰性對照可確保在未知生物樣品中進行精確定量并排除假陰性。在多種樣品基質(zhì)中均觀察到了低至µg/mL 的檢測限。