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重組蛋白純化是生物制藥過程中的關(guān)鍵步驟，其目的在于從復(fù)雜的生物混合物中提取出高純度的目標(biāo)蛋白。重組蛋白純化的工藝過程涉及多個(gè)階段，以下是對(duì)這些階段的詳細(xì)介紹：
1.樣品準(zhǔn)備
預(yù)處理：在準(zhǔn)備好所有設(shè)備及耗材后，對(duì)目的蛋白進(jìn)行預(yù)處理，去除雜質(zhì)、組織、脂肪等，保證樣品的生物活性。
裂解細(xì)胞：如果目標(biāo)蛋白存在于細(xì)胞內(nèi)，需要通過機(jī)械或化學(xué)方法裂解細(xì)胞，釋放出目標(biāo)蛋白。
2.初步分離
離心：利用離心技術(shù)將大部分細(xì)胞碎片和未破裂的細(xì)胞分離出去。
過濾：通過過濾器進(jìn)一步去除較大的雜質(zhì)顆粒。
3.層析法純化
離子交換色譜：基于蛋白質(zhì)表面的電荷差異進(jìn)行分離。
凝膠色譜：根據(jù)蛋白質(zhì)分子的大小和形狀進(jìn)行分離。
親和色譜：利用特異性配體與目標(biāo)蛋白之間的親和力進(jìn)行分離。
疏水相互作用色譜：基于蛋白質(zhì)表面疏水性區(qū)域的差異進(jìn)行分離。
4.中間純化步驟
捕獲步驟：濃縮目的蛋白，使其與有害的、宿主細(xì)胞衍生組分（如蛋白酶）分離，避免使目的蛋白發(fā)生降解。
洗滌步驟：在洗脫前采用洗滌步驟減少雜質(zhì)數(shù)量。
5.精純步驟
去除痕量雜質(zhì)：使用陰離子交換或帶陰離子基團(tuán)的多模式層析幫助清除帶負(fù)電荷的雜質(zhì)，如DNA、病毒及前兩個(gè)步驟中未去除的與產(chǎn)品有關(guān)的其他雜質(zhì)。
6.驗(yàn)證運(yùn)行
評(píng)估純化效果：對(duì)經(jīng)過純化處理的樣品進(jìn)行評(píng)估，包括純度、收率等指標(biāo)的檢測(cè)。
