產(chǎn)品簡介

  大腸桿菌經(jīng)Ca離子處理后可攝取外源DNA（Plasmid、Phage DNA），處于這種狀態(tài)的細胞稱作感受態(tài)細胞（Competent Cells）。在進行基因重組實驗時，使用感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化實驗應用十分廣泛。制作基因文庫、重組質(zhì)粒體以及進行亞克隆實驗時，特別是在目的基因含量十分低的情況時，使用的感受態(tài)細胞十分重要。本公司生產(chǎn)的感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，長期以來備受廣大客戶的喜愛，可用于DNA的化學轉(zhuǎn)化。使用pUC57質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達107～108，在-70℃下保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

使用方法

  1.將100μl感受態(tài)細胞于冰上解凍。應注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。

  2.取5μl連接產(chǎn)物加入到感受態(tài)細胞中，輕輕旋轉(zhuǎn)幾次以混勻內(nèi)容物。在冰上放置30min。

  3.將管放入預加溫到42℃的水浴中，熱激90秒?？焖賹⒐苻D(zhuǎn)移到冰浴中，使細胞冷卻2～3min。該過程不要搖動離心管。

  4.每管中加900μl LB(SOC)培養(yǎng)基(不含抗生素)，37℃振蕩培養(yǎng)1h。目的是使質(zhì)粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

  5.室溫4,000rpm離心5min，棄去900μl上清后，用剩余100μl培養(yǎng)基重懸細胞并涂布到含相應抗性的LB瓊脂平板或含X-gal、IPTG、相應抗性的LB瓊脂平板表面。注意：細胞用量應根據(jù)連接效率和感受態(tài)細胞的效率進行調(diào)整。

  6.將平板置于室溫直至液體被吸收。

  7.倒置平皿，于37℃培養(yǎng)，12～16h后可出現(xiàn)菌落。

儲存條件
  -70℃凍存

注意事項

  1.感受態(tài)應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。

  2.進行轉(zhuǎn)化操作時，應根據(jù)相應溫度及無菌條件的要求進行。

  3.為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。

上海淳麥生物科技有限公司終解釋