MicroSnap菌落總數(shù)檢測(cè)拭子使用方法

MicroSnap菌落總數(shù)檢測(cè)拭子組成：

1.         MicroSnap TOTAL增菌拭子，貨號(hào)：MS1-TOTAL。

2.         MicroSnap TOTAL檢測(cè)拭子，貨號(hào)：MS2-TOTAL。

說明與用途：

MicroSnap TOTAL（細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)拭子）是一種快速生物發(fā)光檢測(cè)方法，用于對(duì)不同種類樣品中的細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)數(shù)，檢測(cè)結(jié)果可以在7小時(shí)內(nèi)獲得。MicroSnap TOTAL 由一支帶有特定生長培養(yǎng)基的增菌拭子和一支帶有生物發(fā)光試劑的檢測(cè)拭子所組成，對(duì)目標(biāo)菌所產(chǎn)生的生物標(biāo)記信號(hào)（光子）可通過配套的便攜式EnSURE熒光儀來測(cè)定。

檢測(cè)需分兩個(gè)步驟，首先采用增菌拭子進(jìn)行短時(shí)間的孵育來促進(jìn)細(xì)菌的生長，然后用檢測(cè)拭子進(jìn)行測(cè)定。在增菌拭子孵育期間，細(xì)菌數(shù)量會(huì)增加，而潛在的樣品干擾會(huì)被降低。細(xì)菌生長過程中會(huì)產(chǎn)生具有酶活性的生物標(biāo)記物，細(xì)菌數(shù)量越多，所產(chǎn)生的生物標(biāo)記物濃度越高，發(fā)出的光也越多。將增菌后的樣品轉(zhuǎn)送至檢測(cè)拭子中，經(jīng)過拭子的激活、混合步驟后在熒光儀上進(jìn)行測(cè)量。光的輸出量與生物標(biāo)記物的濃度和所存在細(xì)菌的數(shù)量呈正比。

MicroSnap TOTAL細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)拭子可用于檢測(cè)環(huán)境表面、各類產(chǎn)品樣品、水以及其它可過濾液體樣本等。

需要但不提供的材料：

l   30±1℃的孵育器

l   EnSURE熒光儀

l   稀釋液，例如：

? 緩沖蛋白胨水（BPW）

? 最大恢復(fù)稀釋液（MRD）

? 磷酸鹽緩沖液（Butterfields）

? 用戶選擇的其它驗(yàn)證過的稀釋液

l   采樣袋

l   攪拌器

    表1：動(dòng)態(tài)范圍（檢測(cè)限）：

    若某些樣品的污染超出了表1中所列的范圍，則必須進(jìn)行以下的梯度稀釋才可在熒光儀上讀數(shù)：

l   1%懸液為1000-500,000 CFU

l   0.1%懸液為10,000-5,000,000 CFU

l   注意：當(dāng)檢測(cè)多個(gè)梯度稀釋時(shí)，必須同時(shí)準(zhǔn)備和檢測(cè)所有的稀釋液以獲得線性結(jié)果。

說明：

步驟1：增菌

增菌程序如下描述并可參照?qǐng)D表的步驟1.

1. 采集樣品并放置于MicroSnap TOTAL增菌拭子中（MS-E-TOTAL）。

       樣品可以是：

i.         表面——涂抹4X4英寸（10X10厘米）的平面，對(duì)于不規(guī)則表面則盡可能大面積地采集有代表性的樣品。

ii.        液體——1ml液體食物、飲料或水樣可直接加到增菌拭子中。

iii.      產(chǎn)品——1ml合適的懸液，例如將10% W/V（重量/體積）食物勻漿直接添加到增菌拭子中。食物勻漿的準(zhǔn)備應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)微生物程序執(zhí)行。對(duì)于未知的樣品污染，應(yīng)準(zhǔn)備低于10% 的稀釋液進(jìn)行檢測(cè)。

注意：當(dāng)進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)時(shí)，兩種方法的樣品分析必須在10分鐘內(nèi)開始以獲得可比性結(jié)果。

2. 將拭子重新插入拭子管中，恢復(fù)剛從拭子袋中取出時(shí)的樣子。

3. 緊握拭子管并用拇指和食指前后彎曲球閥，折斷頂部的Snap-Valve閥來激活拭子。

4. 輕提球閥（大約1~2英寸）以釋放內(nèi)壓，然后擠壓球閥將所有培養(yǎng)基釋放到拭子管底部，確保大部分的增菌肉湯集中在拭子管底部。

5. 將拭子重新插入拭子管中并旋緊密封。

6. 輕輕地?fù)u晃管子，將樣品和增菌肉湯充分混合。

7. 在30±1℃溫度下孵育7個(gè)小時(shí)± 10分鐘。

步驟2：檢測(cè)

檢測(cè)程序如下描述并可參照?qǐng)D表的步驟2。在開始步驟2之前，先開啟EnSURE熒光儀。若已經(jīng)編程了檢測(cè)位，可選擇出要檢測(cè)的檢測(cè)位。

1. 將MicroSnap TOTAL（MS-TOTAL100）檢測(cè)拭子從冷藏條件下取出后室溫放置10分鐘。將拭子在手掌上輕拍5次或向下用力地敲打一次，使提取液流到管子底部。

2. 將增菌后的樣品從增菌拭子中轉(zhuǎn)移到檢測(cè)拭子中。增菌拭子可用作移液管，方便使用。

i.         擠壓并釋放增菌拭子的球閥，使樣品吸回到球閥中。

ii.        將增菌拭子從管子中取出。

iii.      通過扭動(dòng)并抽出球閥將檢測(cè)拭子打開，然后放在一邊待用。

    a. 將增菌拭子的拭子頭插入檢測(cè)拭子管中（大約1英寸或3厘米），然后輕輕擠壓增菌拭子球閥將增菌樣品慢慢滴入管中直到容量達(dá)到檢測(cè)拭子管上標(biāo)記的填充線。避免添加樣品超過填充線，因?yàn)檫@可能增加檢測(cè)結(jié)果的變量。

iv.      剩余的增菌樣品可以返回到增菌拭子中用于其它檢測(cè)。將增菌拭子重新裝配至原始狀態(tài)并放置于孵育器中。

    注意：當(dāng)檢測(cè)來自同一增菌樣品的重復(fù)樣品時(shí)，所有的重復(fù)品必須在10分鐘內(nèi)進(jìn)行以獲得可比性的結(jié)果。

v.       將檢測(cè)拭子重新裝配至原始狀態(tài)。

3. 緊握拭子管并用拇指和食指前后彎曲球閥，折斷頂部的Snap-Valve閥來激活檢測(cè)拭子。擠壓球閥3次以釋放所有的液體到拭子管底部。

4. 輕晃管子使其充分混合。

5. 立即將整個(gè)拭子插入熒光儀中，關(guān)閉蓋子并保持直立，按下OK鍵開始測(cè)量。倒數(shù)15秒出結(jié)果。

6. 熒光儀顯示屏上為RLU（相對(duì)光單位）讀數(shù)，在熒光儀上設(shè)置符合所要求的CFU限值的RLU臨界值。參照以下“結(jié)果判定"對(duì)應(yīng)表換算出CFU數(shù)值。

結(jié)果判定：

EnSURE熒光儀顯示的結(jié)果是相對(duì)光單位（RLU）。RLU值與初始接種菌量呈正相關(guān)，并可與細(xì)菌數(shù)量（菌落形成單位，CFU）進(jìn)行換算。下面表2中給出了RLU值與CFU值的對(duì)應(yīng)關(guān)系。