ELISA與Western Blot實驗的區(qū)別

　　ELISA與Western Blot實驗的區(qū)別

　　一、基本原理與核心差異

　　ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)?

　　基于抗原-抗體特異性結合，通過酶

　　標記信號放大(如HRP催化顯色)實現(xiàn)檢測，通常使用96孔聚苯乙烯酶標板作為固相載體?。

　　適用于溶液樣本(如血清、細胞培養(yǎng)上清)的定量分析，靈敏度高且可高通量操作?。

　　Western Blot(蛋白質免疫印跡)?

　　需先通過SDS-PAGE電泳分離蛋白質，再轉印至固相膜(如PVDF膜)，通過抗體結合和化學發(fā)光/顯色檢測目標蛋白?。

　　可提供蛋白質分子量信息，適用于定性或半定量分析，尤其適合研究翻譯后修飾?。

　　二、操作流程對比

　　步驟? ?ELISA? ?Western Blot?

　　樣本處理? 直接檢測液體樣本，無需電泳 需提取蛋白并電泳分離?

　　檢測方式? 酶標儀讀取吸光度(OD值) 化學發(fā)光/顯色成像系統(tǒng)?

　　耗時? 數(shù)小時(快速) 1-2天(復雜)?

　　三、應用場景選擇

　　ELISA優(yōu)先?：

　　需高精度定量(如細胞因子濃度測定)?。

　　高通量篩選(如藥物開發(fā)中的抗體檢測)?。

　　Western Blot優(yōu)先?：

　　需分析蛋白質分子量或翻譯后修飾?。

　　驗證蛋白質表達水平(如基因敲除效果)?。

　　四、技術局限性

　　ELISA?：無法區(qū)分蛋白質亞型或修飾，依賴抗體特異性?。

　　Western Blot?：定量誤差較大，操作復雜且通量低?。

　　五、總結

　　ELISA與Western Blot雖均基于免疫反應，但ELISA以定量見長，Western Blot以定性分析為優(yōu)，選擇時需結合實驗目的(定量/定性)、樣本類型及設備條件綜合判斷?。

　　注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術老師或品牌供應商。

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