小鼠白介素22(IL-22)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書

　　小鼠白介素22(IL-22)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書

　　BS-9441小鼠白介素22(IL-22)ELISA試劑盒

　　一、產(chǎn)品概述

　　本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，專用于小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-22的特異性定量檢測。其核心原理為：預(yù)包被于微孔板的IL-22單克隆捕獲抗體與樣本中的IL-22結(jié)合，隨后加入生物素化檢測抗體形成夾心復(fù)合物，再通過鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物催化TMB顯色，在450nm波長下測定吸光度值與IL-22濃度呈正相關(guān)?。

　　二、技術(shù)參數(shù)

　　檢測范圍?：31.25-2000pg/mL(典型值)?

　　靈敏度?：低檢出量22.6pg/mL?

　　特異性?：與IL-15、IL-20、IL-29等無交叉反應(yīng)?

　　重復(fù)性?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%?

　　樣本類型?：血清、血漿、細(xì)胞上清液等?

　　三、試劑盒組成

　　組分 規(guī)格 保存條件

　　預(yù)包被微孔板 96孔/板 2-8℃(避光)

　　標(biāo)準(zhǔn)品(凍干) 6濃度梯度 -20℃(長期)

　　生物素化抗體 濃縮液(50×) -20℃(長期)

　　HRP-鏈霉親和素 濃縮液(50×) -20℃(長期)

　　TMB底物溶液 11mL 2-8℃(避光)

　　終止液(2M H?SO?) 6mL 室溫

　　20×洗滌緩沖液 50mL 室溫

　　四、樣本處理規(guī)范

　　樣本采集

　　血清?：室溫靜置10-20分鐘，2000-3000g離心20分鐘，取上清?。

　　血漿?：EDTA抗凝，混合后離心，避免溶血或脂血樣本。

　　細(xì)胞上清?：離心去除細(xì)胞碎片，建議添加蛋白酶yizhi劑。

　　保存與稀釋

　　短期保存?：4℃(≤1周)。

　　長期保存?：-20℃(1個月)或-80℃(3個月)，避免反復(fù)凍融。

　　稀釋方案?：高濃度樣本需用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋，推薦梯度稀釋(如100倍、1000倍)。

　　五、實(shí)驗(yàn)步驟

　　試劑準(zhǔn)備?

　　洗滌液：20×濃縮液用蒸餾水稀釋為1×工作液?。

　　酶結(jié)合物：50×濃縮液用稀釋液配制為1×工作液?。

　　加樣與孵育?

　　每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本，37℃孵育1小時?。

　　加入生物素化抗體工作液，37℃孵育1小時?。

　　洗滌與顯色?

　　洗滌：每孔加入300μL洗滌液，重復(fù)3次?。

　　加入HRP-鏈霉親和素工作液，37℃孵育30分鐘?。

　　洗滌：重復(fù)5次?。

　　顯色：每孔加入90μL TMB，37℃避光孵育15分鐘?。

　　終止與讀數(shù)?

　　加入50μL終止液，450nm波長測定OD值?。

　　六、結(jié)果分析

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線?：以O(shè)D值為縱坐標(biāo)、IL-22濃度為橫坐標(biāo)，擬合四參數(shù)邏輯函數(shù)曲線?。

　　樣本濃度?：根據(jù)樣本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得濃度，若超出范圍需稀釋后重測?。

　　七、注意事項(xiàng)

　　試劑保存?：未使用試劑盒需4℃(6個月)或-20℃(12個月)保存，避免反復(fù)凍融?。

　　樣本質(zhì)量?：避免溶血、高血脂或渾濁樣本，離心后確保上清澄清。

　　操作規(guī)范?：加樣時避免氣泡，洗滌需凈;顯色后需及時終止反應(yīng)?。

　　質(zhì)量控制?：建議設(shè)立復(fù)孔以提高準(zhǔn)確性，標(biāo)準(zhǔn)曲線需每次實(shí)驗(yàn)重新繪制?。

　　應(yīng)用范圍?：本試劑盒僅供科研使用。

　　注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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