•最小和最大直徑:定義計(jì)數(shù)對(duì)象的大小范圍。
•圓度:標(biāo)識(shí)根據(jù)形狀計(jì)數(shù)的細(xì)胞。圓度越高
必須對(duì)一個(gè)圓形和全輪廓的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。減少圓度值,以計(jì)數(shù)更多不規(guī)則的細(xì)胞。
•閾值:根據(jù)方案中設(shè)置的強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)篩選每個(gè)計(jì)數(shù)的細(xì)胞。
AO/PI:提高閾值以排除低熒光細(xì)胞。 臺(tái)盼藍(lán)/紅霉素B:提高閾值以排除較輕的細(xì)胞。
•小細(xì)胞模式:提高檢測(cè)限附近的亮場(chǎng)和臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)。
•不規(guī)則細(xì)胞模式:提高橢圓形或不規(guī)則形狀的細(xì)胞計(jì)數(shù)
最佳實(shí)踐
1.通過(guò)采取措施盡量減少細(xì)胞結(jié)塊,確保樣品均勻。
2.裝載前立即混合樣品。
3.使用干燥的實(shí)驗(yàn)室擦拭工具清潔兩個(gè)樣品表面。
4.如果出現(xiàn)樣品裝載問(wèn)題或樣品表面干燥,請(qǐng)用70%的清潔劑進(jìn)行清潔
乙醇。放下手臂,裝入15µL 70%乙醇或10%漂白劑,沖洗干凈將整個(gè)對(duì)準(zhǔn)槽插入樣品室。等待10-15秒,然后用力擦拭 完成兩個(gè)表面的清潔。
啟動(dòng)時(shí)的初始化
在開(kāi)啟儀器之前,確保移除所有包裝材料,并且樣品表面之間沒(méi)有任何東西。打開(kāi)儀器,按照屏幕上的指示操作。清潔后,按確認(rèn)鍵完成初始化。注意:不要使用USB端口給手機(jī)或平板充電。
加載
將移液器放置在45°角。將移液器頂部沿對(duì)準(zhǔn)槽滑動(dòng),直到它靠在頂部表面。
使用干燥的折疊實(shí)驗(yàn)室擦拭布。用一到兩次有力的擦拭,擦拭樣品的上下表面。擦拭時(shí)只朝一個(gè)方向,不要來(lái)回擦拭。
選擇一個(gè)應(yīng)用程序
清潔:使用干燥的折疊實(shí)驗(yàn)室擦拭布。用一到兩次堅(jiān)定的擦拭,擦拭樣品的上下表面。擦拭時(shí)只朝一個(gè)方向,不要來(lái)回擦拭。
預(yù)安裝的EasyApps™軟件包括用于細(xì)胞計(jì)數(shù)和存活率評(píng)估的流行應(yīng)用程序。機(jī)載用戶指南解釋了其他可用的應(yīng)用程序,例如酵母計(jì)數(shù)或用于轉(zhuǎn)染研究的GFP。
明場(chǎng):組織培養(yǎng)總細(xì)胞計(jì)數(shù)
臺(tái)盼藍(lán):組織培養(yǎng)總細(xì)胞計(jì)數(shù)和存活率
AO/PI:組織培養(yǎng)或原代細(xì)胞樣本的熒光計(jì)數(shù)和存活率評(píng)估,特別是含有碎片的樣本
載重傳感器
加載樣本并讓傳感器穩(wěn)定。
熒光模型:選擇通道
聚焦
• 手動(dòng):使用上下箭頭調(diào)整焦點(diǎn)?;罴?xì)胞中心明亮,邊緣清晰。
• 自動(dòng):粗略聚焦細(xì)胞,然后按自動(dòng)按鈕。
曝光
熒光
使用通道選擇器選擇綠色或紅色通道。點(diǎn)擊曝光圖標(biāo)。調(diào)整每個(gè)通道的信號(hào),使其盡可能明亮,但不要超出細(xì)胞邊界。
臺(tái)盼藍(lán)染色
• 正常:0.4% 臺(tái)盼藍(lán)試劑與細(xì)胞懸液等量混合。
• 低:0.2% 臺(tái)盼藍(lán)試劑與細(xì)胞懸液等量混合。
當(dāng)對(duì)實(shí)時(shí)預(yù)覽圖像滿意時(shí),按下計(jì)數(shù)按鈕。CellDrop將捕捉所有通道的圖像并計(jì)算所有結(jié)果。
優(yōu)化
檢查結(jié)果并根據(jù)需要優(yōu)化計(jì)數(shù)設(shè)置。設(shè)置可以保存到協(xié)議中。使用屏幕滑塊或全屏直方圖視圖調(diào)整大小門限。當(dāng)手臂抬起時(shí),結(jié)果將被保存。
圖表
從結(jié)果選項(xiàng)卡中,選擇圖表以查看計(jì)數(shù)、存活率、大小分布和聚類圖表的選項(xiàng)。
導(dǎo)出與數(shù)據(jù)分析
正確
暴露
暴露
在暴露
• 分享或?qū)С鰡卧裼?jì)數(shù)結(jié)果、報(bào)告、截圖和圖像。
• 導(dǎo)出選項(xiàng)包括電子郵件、網(wǎng)絡(luò)打印機(jī)、USB和網(wǎng)絡(luò)驅(qū)動(dòng)器。
• 使用設(shè)置應(yīng)用程序配置Wi-Fi、網(wǎng)絡(luò)打印機(jī)、網(wǎng)絡(luò)文件夾和電子郵件。
• 在用戶賬戶應(yīng)用程序中管理常用的電子郵件地址。
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