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目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實(shí)驗(yàn)試劑>>試劑盒>> 磷脂酶C(PLC)測(cè)試盒

磷脂酶C(PLC)測(cè)試盒
  • 磷脂酶C(PLC)測(cè)試盒
參考價(jià) 面議
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磷脂酶C(PLC)測(cè)試盒 磷脂酶C( Phospholipases C,PLC )試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品.為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。

磷脂酶C(PLC)測(cè)試盒

微量法100T/96S

注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

磷脂酶C(EC3.1.4.3)是一種水解甘油磷酸酯C3位點(diǎn)甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶,廣泛存在于微生物及動(dòng)植物的組織和細(xì)胞中,在細(xì)胞代謝、細(xì)胞傳遞、生長(zhǎng)發(fā)育等方面具有重要作用。

測(cè)定原理

磷脂酶C催化水解NPPC產(chǎn)生對(duì)硝基苯酚,在410nm處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體102mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體8mL×1瓶,4℃保存。

酶液提取

  1. 組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

  2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

  3. 血清:直接測(cè)定。

測(cè)定操作


空白管

測(cè)定管

樣品(μL)


20

試劑一(μL)

20


試劑二(μL)

100

100

充分混勻,37℃反應(yīng)30min

試劑三(μL)

80

80

充分混勻,于微量石英比色皿/96孔板,蒸餾水調(diào)零,測(cè)定410nm處吸光值,分別記為A空白管和A測(cè)定管,△A=A測(cè)定管-A空白管。

酶活計(jì)算公式

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0191x - 0.0103,R2 = 0.9991

1.按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T

= 17.45×(△A+0.0103)÷ Cpr

2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義每克組織每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/g 鮮重)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T

= 17.45×(△A+0.0103)÷ W

3.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/104 cell)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量) ÷T

= 17.45×(△A+0.0103)÷ 細(xì)胞數(shù)量

4.按照液體體積計(jì)算

酶活性定義每毫升血清每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/mL)= (△A+0.0103)÷ 0.0191×V反總÷V樣÷T

= 17.45×(△A+0.0103)

V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min

  1. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0095x - 0.0103,R2 = 0.9991

1.按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷ 0.0095×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T

= 35.09×(△A+0.0103)÷ Cpr

2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義每克組織每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/g 鮮重)=(△A+0.0103)÷ 0.0095×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T

= 35.09×(△A+0.0103)÷ W

3.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/104 cell)=(△A+0.0103)÷ 0.0095×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量) ÷T

=35.09×(△A+0.0103)÷ 細(xì)胞數(shù)量

4.按照液體體積計(jì)算

酶活性定義每毫升血清每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/mL)= (△A+0.0103)÷ 0.0095×V反總÷V樣÷T

= 35.09×(△A+0.0103)

V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min


上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

  2. 國(guó)外試劑的訂購(gòu)??商峁W美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購(gòu)方案。

  3. 提供加急物流處理,進(jìn)口貨物,最快交期1-2周。

  4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

  5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 質(zhì)量保證,所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式,為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國(guó)際與國(guó)內(nèi)資源,加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè),提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率,為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運(yùn)作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

磷脂酶C(PLC)測(cè)試盒




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