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養(yǎng)殖場(chǎng)用非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒使用時(shí)應(yīng)該注意什么

閱讀:608        發(fā)布時(shí)間:2021-3-30

養(yǎng)殖場(chǎng)用非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒使用時(shí)應(yīng)該注意什么?【競(jìng)道廠家發(fā)布】How to use African classical swine fever detection kit for farms 型號(hào):JD-ZWSJ2

 

  試劑盒組成及貯藏條件

  名稱20 T50 T

  1、吸附柱20個(gè)50個(gè)

  2、收集管20個(gè)50個(gè)

  3、裂解液5 mL11 mL

  4、洗液I13 mL32 mL

  5,洗液II13 mL32 mL

  6.洗脫液1.2 mL3 mL

  2、 保存條件及有效期:室溫下保存,有效期12個(gè)月.

  3、 需自備材料:無(wú)水乙醇、1.5 mL無(wú)菌離心管、1.5 mL無(wú)菌離心管(長(zhǎng)臂型)、生理鹽水、研缽、無(wú)菌

  1mL, 2OOuL、10uL槍頭、記號(hào)筆等。

  【操作步驟】

  一、樣品制備

  1、 血液樣品:抗凝血樣品置離心管中,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上層血漿;非抗凝血樣品置離心 管中,待凝固后,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上層血清,置于滅菌離心管中,編號(hào)待檢。

  2、 組織樣品:采集脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體等病變組織樣品0.1g.組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨,加入1 mL生理鹽水混勻,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心骨中,編號(hào)待檢。

  3、 口腔液:進(jìn)食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉線綁紗布團(tuán)吸引動(dòng)物咀嚼,收集口腔液大于 500uL, 8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心管中,編號(hào)待檢。

  4、 飼料:取適量研磨后的飼料(約0.2g),放入含1 mL生理鹽水或PBS(PH為7.4)緩沖液的2 mL EP 管屮,振蕩混勻,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心管中,編號(hào)待檢.

  5、 灰塵:用無(wú)菌棉簽蘸取適量環(huán)境表面上的灰塵,放入含1 mL生理鹽水或PBS(PH為7.4)緩沖液的2 mL EP管中,振蕩混勻,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心管中,編號(hào)待檢。

  二、DNA的提取

  1、取裂解液200uL加入無(wú)核酸酶1.5 mL離心曾屮,分別加入血漿/血清/組織液等樣品液200uL. 震蕩混勻10秒或顛倒混勻10次,室溫放置5分鐘(如果室內(nèi)溫度較低時(shí).需放置25C水浴溫育),再加入200uL無(wú)水乙醇,顛倒混勻10秒;若樣品渾濁則先12000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘處理,取上清液,以避免堵塞柱子;

  2、 將液體轉(zhuǎn)入套有收集管的吸附柱中, 12000rpm離心1分鐘:

  3、 棄收集管液體,向吸附柱中加600uL洗液I , 12000 rpm離心1分鐘;

  4、 棄收集管液體,向吸附柱中加600uL洗液II, 12000 rpm離心I分鐘;

  5、 棄收集管液體,12000 rpm離心2分鐘,以*去除殘留洗液;

  6、將吸附柱轉(zhuǎn)入新的無(wú)核酸酸1.5mLEP管(長(zhǎng)臂型)中,向柱中央滴加50 uL洗脫液,靜置1分鐘, 12000 rpm離心1分鐘,EP管中液體即為病毒DNA。

  【注意事項(xiàng)】

  1、 實(shí)驗(yàn)前諾仔細(xì)閱讀本試劑盒說(shuō)明書(shū),嚴(yán)格按照操作步驟執(zhí)行.在操作過(guò)程中對(duì)時(shí)間、試劑體積等 粘確控制可以獲得好的結(jié)果。

  2, 樣本應(yīng)新鮮采集使用,或低溫運(yùn)輸儲(chǔ)存;

  3, 樣本具有潛在感染風(fēng)險(xiǎn),核酸的提取應(yīng)在核酸提取實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜中進(jìn)行。

  4、 核酸提取冇關(guān)耗材確保高溫滅菌,提取后核酸盡快進(jìn)入下一步試驗(yàn)或冷凍保存待用。

  5, 試劑使用前應(yīng)混合均勻,試劑具有一定腐蝕性,使用時(shí)請(qǐng)戴手套、口罩做好防護(hù)。

  6. 低溫下裂解液出現(xiàn)結(jié)晶數(shù)屬正?,F(xiàn)象,可在60°C水浴加熱助溶后使用。

  7、 實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)及時(shí)收集,遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行無(wú)害化處理。

  僅供獸醫(yī)診斷使用

 

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