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液相色譜法測(cè)定紫花苜蓿青貯中的有機(jī)酸
液相色譜法測(cè)定紫花苜蓿青貯中的有機(jī)酸
紫花苜蓿是豆科苜蓿屬多年生草本植物，可以加工成苜蓿草粉，作為家畜配合飼料的主要原料使用，起平衡日糧氨基酸、提供豐富的維生素的作用，并提供纖維素。紫花苜蓿莖葉中含有豐富的蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、多種維生素及胡蘿卜素，特別是葉片中含量更高。
苜蓿青貯或半干青貯，養(yǎng)分損失小，包括半干青貯，加甲酸青貯，拉伸膜青貯等三種技術(shù)紫花苜蓿（Medicago sativa）青貯之后，原料中的可溶性糖等在植物酶或微生物作用下，部分轉(zhuǎn)化為乳酸、乙酸、丙酸、丁酸等有機(jī)酸，青貯飼料的PH下降，抑制有害微生物的繁衍。
乳酸的測(cè)定有蒸餾法、液相色譜法、酶法等，乙酸、丙酸、丁酸等揮發(fā)性脂肪酸的測(cè)定常用氣相色譜法。本方案采用極性較強(qiáng)的離子交換色譜柱，用液相色譜儀對(duì)紫花苜蓿青貯飼料的浸提液進(jìn)行有機(jī)酸測(cè)定，探討了用液相色譜儀一次性測(cè)定乳酸和揮發(fā)性脂肪酸方法的可行性與準(zhǔn)確度。
本方法樣品處理過(guò)程簡(jiǎn)單，分離效果理想，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差低，回收率好，具有良好的重現(xiàn)性和精密度，同時(shí)測(cè)定紫花苜蓿青貯浸提液中的乳酸、乙酸、丙酸、丁酸，約20min即可分離*，所以用HPLC測(cè)定紫花苜蓿青貯飼料中有機(jī)酸更為簡(jiǎn)單、方便、快捷。
儀器
LC600B等度液相色譜儀（南京科捷分析儀器有限公司），包括LC600B高壓恒流泵1臺(tái)、SPD600B紫外檢測(cè)器1臺(tái)、SCL600B系統(tǒng)控制器1臺(tái)、8725i手動(dòng)進(jìn)樣閥1只、反控色譜工作站1 套（內(nèi)置反控主機(jī)）、液相色譜柱1根等。
樣品處理
準(zhǔn)確稱取20g紫花苜蓿青貯，加入200mL蒸餾水，均質(zhì)1min，4層紗布過(guò)濾，濾液用試紙精濾，再用0.45μm濾膜過(guò)濾，浸提液待測(cè)。
色譜條件
色譜柱：Shodex KC-811色譜柱300mm×8mm
流動(dòng)相：3mM高氯酸
柱溫：50℃
檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm
流速：1mL/min
進(jìn)樣量：5μL
色譜圖：
1 乳酸；2 乙酸；3 丙酸；4 丁酸