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藥物中蒽醌類化合物的檢測(cè)方案（液相色譜）
液相色譜儀檢測(cè)牛黃上清丸中4種蒽醌類化合物的含量
牛黃上清丸，中成藥名。為清熱劑，具有清熱瀉火，散風(fēng)止痛之功效。用于熱毒內(nèi)盛、風(fēng)火上攻所致的頭痛眩暈、目赤耳鳴、咽喉腫痛、口舌生瘡、牙齦腫痛、大便燥結(jié)。由人工牛黃、薄荷、菊花、荊芥穗、白芷、川芎、梔子、黃連、黃柏、黃芩、大黃、連翹、赤芍、當(dāng)歸、地黃、桔梗、甘草、石膏、冰片等組成。其中大黃主要含蒽醌、二蒽酮類及其衍生物，蒽醌類具有止血、抗菌、瀉下、利尿的作用，能刺激腸道神經(jīng)叢，促進(jìn)腸蠕動(dòng)。但是蒽醌成分具有肝毒性和腎毒性,還有一定的致癌作用。
本實(shí)驗(yàn)采用液相色譜儀檢測(cè)牛黃上清丸中4種蒽醌類化合物的含量
儀器介紹
LC-600A智能全控液相色譜儀（南京科捷分析儀器有限公司）由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測(cè)器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時(shí)控制數(shù)臺(tái)P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測(cè)器及恒溫柱箱等，具備多元高壓洗脫、波長(zhǎng)掃描等功能；廣泛應(yīng)用于研究開(kāi)發(fā)、醫(yī)藥檢驗(yàn)、食品檢測(cè)、化工分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)等眾多分析領(lǐng)域。
（1）往復(fù)式并聯(lián)泵設(shè)計(jì)，流量精度高，壓力脈動(dòng)小，延長(zhǎng)密封圈和活塞桿的使用壽命；
（2）隔膜式脈沖阻尼器與電子脈動(dòng)抑制技術(shù)同時(shí)控制壓力脈動(dòng)保障zui低的基線噪音；
（3）整體性單向閥，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，密封性好；
?。?/span>4）柱塞桿自動(dòng)縮進(jìn)，方便更換密封圈；
?。?/span>5）可選配柱后清洗功能，適用于使用含緩沖鹽的分析條件。
?。?/span>6）平行雙錐孔設(shè)計(jì)的流動(dòng)池，大幅提高信噪比，檢測(cè)效果更佳；
?。?/span>7）開(kāi)機(jī)自檢功能，通過(guò)圖譜上486.6nm和656nm這二點(diǎn)的位置，以判斷波長(zhǎng)示值誤差的準(zhǔn)確性，保證極優(yōu)的波長(zhǎng)精度，保障儀器*狀態(tài)；
（8）控制電路采用多微處理器結(jié)構(gòu)，分別管理信號(hào)采集、數(shù)據(jù)處理，系統(tǒng)控制和通信。在做等度分析時(shí)，可以方便地通過(guò)全漢字的液晶屏與七個(gè)功能鍵，設(shè)置波長(zhǎng)、濾波常數(shù)、輸出量程，運(yùn)行時(shí)間等參數(shù)。并且可以實(shí)現(xiàn)開(kāi)關(guān)氘燈，光譜掃描，啟動(dòng)分析程序等功能；
（9）全數(shù)字交換系統(tǒng)，避免了色譜信號(hào)需要多重摸-數(shù)轉(zhuǎn)換帶來(lái)的信號(hào)畸變與干擾。
樣品處理：
準(zhǔn)確稱取1.0g試樣，置于100mL具塞提取瓶中，加入25mL甲醇，于超聲波發(fā)生器中提取2h。將提取液經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后，轉(zhuǎn)移至液相色譜進(jìn)樣小瓶中，作為待測(cè)樣品。
色譜條件：
色譜柱 | Kromasil C18柱150mm×4.6mm，5μm |
流動(dòng)相 | 甲醇：0.5%磷酸=75%：25% |
流速 | 1.0mL/min |
柱溫 | 30℃ |
檢測(cè)波長(zhǎng) | 230nm |
進(jìn)樣量 | 10μL |
色譜圖示：
牛黃上清丸中4種蒽醌類化合物的液相色譜圖
1.大黃酸；2.大黃素；3.大黃酚；4.大黃素甲醚