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液相色譜建立梯度洗脫的方法
閱讀:6613 發(fā)布時間:2015-11-16
液相色譜儀建立等度洗脫方法的主要步驟如下:
1 選擇基本色譜條件:
色譜柱:15mm×4.6mm或25mm×4.6mm,C8或C18反相填料,5μm粒度。
流動相:水-乙腈(5~100%)B可變。
梯度時間為:25min(2mL/min)到50min(1mL/min)。
2 調(diào)整梯度范圍
盡可能減少分離開始和結(jié)束時的時間浪費(沒有色譜峰只走基線。
3 調(diào)整分離度
如果色譜圖有很多峰分離度不好,可以延長tG,要延長天G可以增加柱長,減小填料的顆粒度,降低流動相速度。調(diào)節(jié)tG、流動相速度和柱尺寸來保持平均容量因子值。
4 調(diào)節(jié)峰容量
調(diào)節(jié)到色譜圖中能容納所有的峰,改變流速以便使峰與峰的距離合適
5 如果要進一步改變峰間距,就改變有機溶劑的成分。
6 如果樣品的相對分子質(zhì)量大于500,就按S比例增加tG。S 可按下面數(shù)據(jù)進行估計:
樣品相對分子質(zhì)量 | S | 樣品相對分子質(zhì)量 | S |
100 1000 | 4 10 | 10000 100000 | 30 100 |