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液相色譜建立梯度洗脫的方法

閱讀:6613        發(fā)布時間:2015-11-16

液相色譜儀建立等度洗脫方法的主要步驟如下:

選擇基本色譜條件:

色譜柱:15mm×4.6mm25mm×4.6mmC8C18反相填料,5μm粒度。

流動相:水-乙腈(5~100%B可變。

梯度時間為:25min2mL/min)到50min1mL/min)。

調(diào)整梯度范圍

盡可能減少分離開始和結(jié)束時的時間浪費(沒有色譜峰只走基線。

調(diào)整分離度

如果色譜圖有很多峰分離度不好,可以延長tG,要延長天G可以增加柱長,減小填料的顆粒度,降低流動相速度。調(diào)節(jié)tG、流動相速度和柱尺寸來保持平均容量因子值。

調(diào)節(jié)峰容量

調(diào)節(jié)到色譜圖中能容納所有的峰,改變流速以便使峰與峰的距離合適

如果要進一步改變峰間距,就改變有機溶劑的成分。

如果樣品的相對分子質(zhì)量大于500,就按S比例增加tG。可按下面數(shù)據(jù)進行估計:

樣品相對分子質(zhì)量

S

樣品相對分子質(zhì)量

S

100

1000

4

10

10000

100000

30

100


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