重組蛋白表達(dá)：基本概述及常見問題 -賽默飛

重組蛋白是什么？ 

重組蛋白是一種人工制造的蛋白，它是利用被改造成攜帶目的基因的宿主細(xì)胞產(chǎn)生的。重組蛋白與相應(yīng)天然存在的（野生型）蛋白具有相同的氨基酸序列，或者對其序列進(jìn)行修飾以改善性質(zhì)，如溶解度或產(chǎn)量。 

賽默飛提供重組蛋白表達(dá)相關(guān)產(chǎn)品，請?jiān)L問獲取產(chǎn)品信息。 

重組蛋白應(yīng)用 

重組蛋白被廣泛應(yīng)用與生物醫(yī)學(xué)研究、診斷和治療領(lǐng)域中，并已成為各個科研領(lǐng)域的重要工具。其在實(shí)驗(yàn)室中的用途包括： 

· 細(xì)胞培養(yǎng)添加劑，包括用于原代細(xì)胞擴(kuò)增、分化或干細(xì)胞重編程的生長因子 

· 用于疾病模型建模和藥物發(fā)現(xiàn)的類器官和其他?3D 細(xì)胞培養(yǎng) 

· ?通過用重組細(xì)胞因子刺激CAR-T 細(xì)胞的擴(kuò)增 

· 探測細(xì)胞功能和細(xì)胞信號通路的研究工具 

· 用于免疫和產(chǎn)生抗體的抗原 

· 基于細(xì)胞的功能性分析的組成部分，如?細(xì)胞遷移和血管生成 

具有生物活性的重組蛋白 

上述應(yīng)用要求重組蛋白具有生物活性；也就是說，蛋白被細(xì)胞識別并在這些細(xì)胞中引起變化。生物活性可以在適當(dāng)?shù)幕诩?xì)胞的試驗(yàn)中測量，并量化為比活性或 EC₅₀。 

無生物活性的重組蛋白可用作蛋白分析研究的標(biāo)準(zhǔn)，包括免疫測定，如免疫印跡、ELISA、凝膠移位和免疫組織化學(xué)。 

重組蛋白的類型 

許多在生物學(xué)上重要的重組蛋白都可從市場上購得，因此無需表達(dá)、純化和驗(yàn)證常用的生物活性重組蛋白。 

重組蛋白的主要類型包括： 

· 生長因子：細(xì)胞產(chǎn)生并用于通訊的一組細(xì)胞間信號蛋白。它們刺激各種細(xì)胞過程，包括細(xì)胞分裂、分化、遷移和存活。突出的生長因子家族包括：? 

o FGF：成纖維細(xì)胞生長因子 

o VEGF：血管內(nèi)皮生長因子 

o 神經(jīng)營養(yǎng)因子：主要作用于大腦和神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)細(xì)胞的一類生長因子 

· 細(xì)胞因子：包括對免疫細(xì)胞功能和通訊至關(guān)重要的干擾素、白細(xì)胞介素、促炎細(xì)胞因子和趨化因子 

· 酶：能進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)化的生物活性蛋白；包括重組蛋白酶、激酶和核酸酶 

重組蛋白生產(chǎn)類別 

當(dāng)為特定應(yīng)用選擇重組蛋白時，了解需要哪種等級的質(zhì)量控制和文件是有幫助的。 

僅供研究使用 (RUO) 

研究級重組蛋白適用于多種生命科學(xué)研究應(yīng)用，包括細(xì)胞模型開發(fā)、維持細(xì)胞表型和體外分析。 

無動物成分 

作為防止動物病原體污染的額外保護(hù)措施，無動物來源成分重組蛋白是使用非動物來源的原料制成的。 

GMP 重組蛋白 

遵循GMP準(zhǔn)則生產(chǎn)的重組蛋白經(jīng)過了廣泛的測試，并附有文件，以支持更高要求的項(xiàng)目/應(yīng)用。 

無論開展基礎(chǔ)研究還是開發(fā)新一代工程化細(xì)胞療法，您都需要能夠依賴實(shí)驗(yàn)中使用的重組蛋白的質(zhì)量及完整性。作為主要重組蛋白供應(yīng)商和制造商，賽默飛世爾科技提供大量高質(zhì)量的 Invitrogen 和 Gibco 品牌蛋白（包括 Gibco?PeproTech?蛋白），以滿足這些需求。 

重組蛋白常見問題 

如何測定重組蛋白的生物活性？ 

生物測定旨在測量給定生長因子或細(xì)胞因子的生物活性。在大多數(shù)情況下，生物測定是基于細(xì)胞的檢測，會使用不同的指示細(xì)胞，例如原代細(xì)胞或細(xì)胞系。常用的生物測定包括細(xì)胞增殖檢測、趨化作用檢測、細(xì)胞因子生成檢測和細(xì)胞毒性檢測。給定細(xì)胞因子的生物活性以 ED₅₀?表達(dá)，它代表誘導(dǎo) 50% 最大反應(yīng)的細(xì)胞因子濃度。 

以 ED₅₀ 表示的比活度與以單位/mg 表示的比活度之間有何關(guān)系？ 

生物活性蛋白質(zhì)的比活度可通過以下公式確定： 
1 x 10?^6?/ ED?_50?(ng/mL) = 比活性 (units/mg) 

ED?_50?(又稱EC?_50?) 可在重組蛋白的CoA上找到，但我們建議在功能檢測系統(tǒng)中確定特定重組蛋白的ED?₅₀ 

應(yīng)如何復(fù)溶重組蛋白？ 

首先，對容器進(jìn)行離心，使粉末聚集在管的底部。我們通常建議將其復(fù)溶至 0.1 至 1.0 mg/mL 濃度。大多數(shù)蛋白可通過加入無菌蒸餾水復(fù)溶。但產(chǎn)品數(shù)據(jù)表或 CoA 將說明何時需要使用水以外的稀釋液。也可在這些文檔中找到推薦的溶液、載體蛋白濃度和擴(kuò)展的儲存條件。 

應(yīng)如何儲存重組蛋白？ 

通常，我們建議將凍干重組蛋白儲存在 –20°C 下，但可在 4°C 或室溫下短期儲存。復(fù)溶蛋白溶液時，我們建議您制備至少含 10 μL 蛋白溶液的工作等份試液，并在 –20°C 至 –80°C 下儲存。不允許進(jìn)行多次反復(fù)凍融。有關(guān)儲存凍干和復(fù)溶重組蛋白的產(chǎn)品特定說明，請見產(chǎn)品手冊、數(shù)據(jù)表或檢驗(yàn)證書 (CoA)。 

為什么我無法在凍干重組蛋白瓶中看到蛋白沉淀？ 

重組蛋白通常不含載體蛋白或添加劑（如 BSA、HSA、蔗糖等）。因此在凍干過程中，蛋白成品可能為薄薄的，有時肉眼不可見的薄膜形式沉積在小瓶上，而非顆粒狀。沉淀物的大?。ㄈ绻校┡c樣品瓶中的重組蛋白數(shù)量沒有直接關(guān)系。 

為確保蛋白產(chǎn)物的回收，在打開凍干重組蛋白瓶之前，建議對其進(jìn)行離心 20–30 秒，以將可能殘留在瓶蓋或側(cè)面的任何蛋白聚集到瓶底。復(fù)溶后，您可以通過在 SDS-PAGE 上運(yùn)行少量產(chǎn)品來確認(rèn)是否存在產(chǎn)品蛋白。通常來說，只要在丙烯酰胺凝膠上上樣 10 ng 的蛋白，應(yīng)該就能看到預(yù)期大小的蛋白條帶。 

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