CXCL2 檢測(cè)沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品？自建校準(zhǔn)曲線的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)做法

細(xì)胞培養(yǎng)上清里的 CXCL2 半衰期只有 90 min，廠家原裝標(biāo)準(zhǔn)品 6 周后濃度偷偷掉 20 %。用失控的尺子量樣本，數(shù)據(jù)發(fā)到審稿人手里直接被退回。把行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)拆成六步，每一步都給出可驗(yàn)證的數(shù)字，實(shí)驗(yàn)室才能隨時(shí)掏出被藥監(jiān)局認(rèn)可的溯源鏈。

1. 主校準(zhǔn)品：WHO NIBSC 代碼 92-518 的用法

• 92-518 每支 10 000 IU，換算系數(shù) 1 IU = 0.047 ng CXCL2

• 復(fù)溶后先分裝 50 μL 凍存管，?80 °C 一次凍存，禁止二次化凍

• 每管只測(cè)一次，剩余丟棄，避免蛋白吸附損失 3 %

• 記錄開瓶日期、分裝次數(shù)，審計(jì)時(shí)這就是原始溯源記錄

2. 工作曲線稀釋液：0.5 % BSA 為何優(yōu)于 PBS 裸液

• PBS 裸液里 CXCL2 24 h 后回收率掉到 85 %，非特異吸附明顯

• 0.5 % BSA + 0.05 % Tween-20 能把回收率拉回 98 %

• 稀釋液現(xiàn)配現(xiàn)用，4 °C 存放超過(guò) 72 h 直接報(bào)廢，寫進(jìn) SOP 不被挑戰(zhàn)

3. 六點(diǎn)曲線濃度：覆蓋 7–2000 pg/mL 的區(qū)間設(shè)計(jì)

• 最高 2000 pg/mL 對(duì)應(yīng)嚴(yán)重炎癥小鼠血清峰值，較低 7 pg/mL 接近健康人基線

• 采用 1:3 系列稀釋，減少移液步驟，誤差比 1:2 稀釋降低 30 %

• 每個(gè)濃度雙孔上樣，孔間差 >5 % 整板重測(cè)，數(shù)據(jù)不被質(zhì)疑

4. 擬合方程：四參數(shù) Logistic 的權(quán)重設(shè)置

• 權(quán)重 1/Y2 能把低濃度點(diǎn)偏差壓到 3 % 以內(nèi)，不加權(quán)重低段偏差 12 %

• 軟件輸出 R2 ≥ 0.998，AIC 值 < ?8，才算合格曲線

• 擬合失敗時(shí)先查最高濃度 OD 是否 >3.0，超出酶標(biāo)儀線性區(qū)直接稀釋重來(lái)

5. 批間溯源：QC 樣本的允許偏差窗

• 用 400 pg/mL 自建 QC，每批隨樣檢測(cè)，靶值 ±10 % 為綠燈區(qū)

• 連續(xù) 3 批 QC 落在 12 % 外，啟動(dòng) CAPA：重新標(biāo)定主校準(zhǔn)品

• 把 QC 趨勢(shì)圖打印簽字，藥監(jiān)局飛檢時(shí)首份被抽，缺失就開缺陷條

6. 報(bào)告格式：量值單位與不確定度

• 結(jié)果報(bào)告寫 “CXCL2：523 pg/mL，U=±46 pg/mL（k=2）"

• 不確定度來(lái)自 3 個(gè)分量：校準(zhǔn)品 3 %、稀釋 2 %、測(cè)量 4 %，合成后 8.8 %

• 審稿人看到不確定度才會(huì)放行，缺項(xiàng)直接退回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)