IGF-1 定量檢測：把實(shí)驗(yàn)誤差壓進(jìn) ±5% 的技術(shù)參數(shù)拆解

1. 校準(zhǔn)品溯源鏈：WHO 96/538 到實(shí)驗(yàn)室 IU 值

IGF-1 國際單位 1 IU = 0.1 μg，WHO 96/538 是可得固體標(biāo)準(zhǔn)。試劑盒把溯源頁寫進(jìn) COA，斜率 0.98–1.02、截距 ±0.5 μg/L 才算合格。缺這條數(shù)據(jù)，多中心研究換算系數(shù)會漂 8%，文章返修時(shí)只能重新測全部樣本。

2. 檢測下限與功能靈敏度是兩回事

廠商常把 0.02 μg/L 作為“檢出限"，用的是緩沖液+3SD 算法。換成血清后，基質(zhì)蛋白把背景抬高，功能靈敏度實(shí)際 0.15 μg/L。采購單要求寫明“血清功能靈敏度"，并附 6 次獨(dú)立實(shí)驗(yàn) CV ≤20% 的數(shù)據(jù)，才能覆蓋兒童血清 0.5–2 μg/L 的低值區(qū)間。

3. 線性范圍與稀釋回收

成人血清 IGF-1 濃度 5–40 μg/L，肢端肥大癥可沖到 200 μg/L。試劑盒標(biāo) 300 μg/L 上限，卻常漏寫稀釋線性。用 1:10 稀釋液回收率 <90% 就證明高劑量鉤狀。選附帶 4 點(diǎn)稀釋驗(yàn)證報(bào)告的款，回收率 90–110%，省得自己再花兩天做線性。

4. 抗體特異性：是否識別 IGF-2 與胰島素

IGF-1 與 IGF-2 同源 62%，與胰島素同源 40%。交叉反應(yīng)率寫 0.05% 看似漂亮，但 IGF-2 生理濃度是 IGF-1 的 3 倍，實(shí)際干擾可達(dá) 0.15 μg/L。索要交叉曲線，選 IGF-2 500 μg/L 時(shí)表觀 IGF-1 <0.1 μg/L 的抗體對，低值樣本才穩(wěn)。

5. 糖化 IGF-1 識別能力

血清里 5–8% IGF-1 被糖化，糖化位點(diǎn)在 Lys68。傳統(tǒng)單抗抓 30–40 區(qū)段不受影響，識別 60–70 區(qū)段的會漏掉糖化分子。試劑盒注明“識別糖化型"能把糖尿病人群濃度差從 ?12% 拉到 ?3%，避免臨床被投訴“結(jié)果偏低"。

6. 平臺轉(zhuǎn)移系數(shù)：化學(xué)發(fā)光 vs 質(zhì)譜

ID-LC-MS/MS 是仲裁方法，化學(xué)發(fā)光法 slope 0.94–1.06 才算可接受。采購時(shí)讓廠家附帶 100 例血清 Passing-Bablok 回歸，斜率落在外部就拒收。多中心項(xiàng)目統(tǒng)一平臺，否則 8 μg/L 診斷切點(diǎn)會漂到 7.2–8.8 μg/L，直接改寫參考區(qū)間。

7. 校準(zhǔn)頻率與穩(wěn)定性

液體校準(zhǔn)品 2–8 °C 開瓶 30 天活性掉 6%，凍干品復(fù)溶后 8 h 內(nèi)用掉。寫 SOP：每次實(shí)驗(yàn)前用高、低質(zhì)控各 1 點(diǎn)確認(rèn)校準(zhǔn)，偏差 >5% 就重校。把校準(zhǔn)曲線斜率自動截圖附在原始記錄，審計(jì)官直接打勾。

8. 板內(nèi)/板間 CV 驗(yàn)收

廠家標(biāo)板內(nèi) CV 3% 用的是緩沖液樣本。自己用 3 μg/L、15 μg/L、35 μg/L 血清做 10 復(fù)孔，板內(nèi) CV ≤5%、板間 CV ≤8% 才簽字驗(yàn)收。把數(shù)據(jù)貼在冰箱門，下一批試劑到貨先對比，超標(biāo)立即退貨，避免整批數(shù)據(jù)被質(zhì)疑。

9. 設(shè)備參數(shù)匹配表

• 化學(xué)發(fā)光：需要 450 nm 觸發(fā)、630 nm 發(fā)射，讀數(shù)窗口 1 s/孔，PMT 電壓 800 V，燈源壽命 1 000 h，LED 模組可拉到 10 000 h。

• 微孔板：高結(jié)合力透明板，發(fā)光本底 ≤150 RLU，白底板能把信號提高 25%，但交叉 talk 增加 0.3%，選帶黑色邊框的款。

• 洗板機(jī)：注液量 300 μL/孔，殘留量 <2 μL，用 0.05% Tween-20 洗 4 次，能把游離抗體降到 0.1 fmol，背景發(fā)光再降 40 RLU。

10. 環(huán)保與廢液

底物液含 0.02% 過氧化氫與 0.05% Proclin 300，混合后 pH 7.4，可直接下水道。校準(zhǔn)品加有 0.02% 疊氮鈉，收集后用 10% 漂白粉氧化 30 min 再棄。發(fā)光板用 70% 乙醇浸泡后回收，重復(fù)利用 3 次，讀數(shù) RLU 衰減 <5%，不影響低值樣本判斷。