OPG 選購指南：把 RANKL 拮抗力折算成每毫克可結(jié)合摩爾數(shù)

1. 活性單位重新定義：別再只看蛋白濃度

藥典仍用 mg 或 IU 標(biāo)注 OPG，真正決定體外抑制效果的是“RANKL 結(jié)合當(dāng)量"。自建 ELISA 競爭法，把 1 μg/mL 生物素化 RANKL 鋪板，加入梯度 OPG，測 IC50。合格批次的 IC50 ≤ 6 ng/mL，對應(yīng) 1 mg OPG 可結(jié)合 18 pmol RANKL，換算成 1.1 × 1013 分子。把這份數(shù)據(jù)寫進(jìn)采購合同，供應(yīng)商無法再用“高純度低活性"蒙混。

2. 表達(dá)系統(tǒng)對比：HEK293 糖基化決定半衰期

E.coli 來源 OPG 單價低至 ￥120/mg，核心活性保留，但缺乏 N-糖基化，血清半衰期從 30 min 起步。HEK293 版本售價翻四倍，糖鏈末端唾液酸化率高，半衰期拉到 4 h，更適合需要連續(xù)刺激 48 h 的破骨誘導(dǎo)實驗。做體內(nèi)阻斷選 HEK293，純體外信號研究可用 E.coli，預(yù)算直接砍掉 75%。

3. 內(nèi)毒素隱形門檻：0.1 EU/mg 是成骨實驗紅線

OPG 本身無 LPS 結(jié)合域，但微量內(nèi)毒素即可通過 TLR4 放大 NF-κB 信號，抵消對破骨細(xì)胞的抑制。ISO 29701 建議“細(xì)胞應(yīng)用級"蛋白內(nèi)毒素 <0.1 EU/mg。拿到貨后別信報告，自己拿 10 μg/mL 蛋白加 THP-1-Blue 報告細(xì)胞復(fù)測，SEAP 讀值 >0.1 OD??? 直接退貨，比打官司更快。

4. 標(biāo)簽取舍：His 標(biāo)簽會堵住 RANKL 結(jié)合面

市面常見 C-端 6×His 設(shè)計，純化方便，但晶體結(jié)構(gòu)顯示 His 標(biāo)簽與 RANKL 的 217–224 片段空間沖突，結(jié)合常數(shù) KD 從 0.8 nM 升到 4 nM。做功能性實驗優(yōu)先選無標(biāo)簽或 Strep-tag II 版本，KD 維持 1 nM 以內(nèi)，純化收率僅下降 15%，數(shù)據(jù)可信度直線上升。

5. 凍干配方：海藻糖 2% + 甘露醇 1% 最穩(wěn)

液體 OPG 4 °C 放置 7 天活性掉 40%。凍干時加 2% 海藻糖做玻璃態(tài)保護(hù)，1% 甘露醇撐起疏松餅狀，復(fù)溶后聚集率 <3%。避免用甘油做保護(hù)劑，它會在凍干過程殘留液態(tài)微區(qū)，蛋白回溶后形成可見顆粒，影響細(xì)胞攝取實驗。

6. 批次平行測試：提前鎖定 50 μg“哨兵"

每批新貨取 50 μg，與舊批次并排跑 RANKL 競爭 ELISA 和 TRAP 破骨誘導(dǎo)抑制實驗，兩點偏差都在 ±10% 以內(nèi)再入庫。把原始曲線貼在 LIMS 系統(tǒng)，審計追蹤直接關(guān)聯(lián)批次號，F(xiàn)DA 現(xiàn)場核查也能 5 分鐘調(diào)檔。

7. 價格陷阱：比活性折算后最貴的不一定最好

品牌 A 報價 ￥2800/mg，IC50 3 ng/mL；品牌 B ￥1500/mg，IC50 5 ng/mL。折算“每升抑制成本"：A 需 0.42 μg，B 需 0.75 μg，實際 B 更貴。把 IC50 與單價同時寫進(jìn) Excel，自動拉公式算“ng-cost index"，指數(shù)低才是性價比的選擇。