AGT 蛋白凍干標(biāo)準(zhǔn)品選購(gòu)指南：別讓“一瓶粉”毀了實(shí)驗(yàn)

1. 先看身份：SerpinA8 到底指哪條序列

• Uniprot 登錄號(hào)：P01019，全長(zhǎng) 485 aa，信號(hào)肽 1-33 已切除，成熟鏈 34-485

• 糖基化位點(diǎn)：Asn 271 其一N-位，占分子量 8-10 kDa，凍干后若無(wú)糖基化保護(hù)條帶會(huì)虛高 5 kDa

• 等電點(diǎn)：pI 5.7，陰離子交換純化用 Q Sepharose 在 pH 8.0 直接穿透，可一步去掉 60 % 宿主蛋白

2. 表達(dá)系統(tǒng)決定下游實(shí)驗(yàn)成敗

活性轉(zhuǎn)化率*：與腎素孵育 37 °C 30 min 產(chǎn)生 AngI 的摩爾產(chǎn)率

無(wú)血清培養(yǎng)基+瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的 HEK293 版本，批間差 CV<6%，做細(xì)胞分泌實(shí)驗(yàn)選擇

3. 凍干工藝細(xì)節(jié)寫(xiě)在 COA 哪一行

• 保護(hù)劑配方：0.5 % HSA + 5 % 海藻糖，復(fù)溶后 2-8 °C 可穩(wěn) 72 h；若只寫(xiě)“sucrose"復(fù)溶 4 h 后活性掉 20 %

• 水分殘留：≤ 3 %，高于 5 % 儲(chǔ)存 6 個(gè)月出現(xiàn)聚集峰（SEC-MALS 可見(jiàn)二聚體 15 %）

• 內(nèi)毒素：<0.1 EU/mg，做原代肝細(xì)胞實(shí)驗(yàn)可直接加樣，無(wú)需額外過(guò)柱除熱原

4. 包裝規(guī)格與分裝策略

• 常見(jiàn)規(guī)格：100 μg、500 μg、1 mg

• 推薦分裝：50 μL/管，濃度 1 mg/mL，避免反復(fù)凍融；鋁箔袋抽真空，?80 °C 存 24 個(gè)月活性無(wú)漂移

• 溶劑選擇：PBS + 0.05 % Tween-20，降低表面吸附，回收率提升 8 %

5. 質(zhì)量文件檢查清單

1. COA：完整 SDS-PAGE 還原/非還原圖，條帶單一

2. 質(zhì)譜分子量：實(shí)測(cè)與理論差 <0.05 %，確保無(wú)截短

3. 生物活性：腎素切 AngI 的 HPLC 峰面積，EC50 報(bào)告 1.2-1.8 nM

4. 微生物：無(wú)菌、支原體陰性，細(xì)胞房使用無(wú)后顧之憂

6. 價(jià)格陷阱：同規(guī)格差 3 倍為哪般

• “科研級(jí)"：無(wú) COA，蛋白含量用 Bradford 估算，誤差 ±30 %，單價(jià) ￥800/100 μg

• “GMP-like"：完整放行文件，可用于 IND 申報(bào)，單價(jià) ￥2600/100 μg

• “cGMP"：FDA 備案，批記錄可審計(jì)，單價(jià) ￥4500/100 μg，商業(yè)化生產(chǎn)才需要

發(fā)文章選 GMP-like 足夠， auditors 只查文件鏈，不查廠房等級(jí)

7. 運(yùn)輸與到貨驗(yàn)收

• 干冰余量：箱內(nèi)干冰 ≥ 2 kg，夏季運(yùn)輸 48 h 內(nèi)溫差 <10 °C

• 外觀檢查：凍干粉白色餅狀，無(wú)塌陷、無(wú)潮解，若有黃色說(shuō)明海藻糖焦化，活性下降 15 % 以上直接退貨

• 復(fù)溶測(cè)試：隨機(jī)抽一管加 1 mL PBS，2 min 內(nèi)澄清，無(wú)顆粒，SEC-MALS 多聚體 <5 %

8. 售后支持與批次鎖定

• 免費(fèi)替換：活性低于標(biāo)示 80 %，廠家承擔(dān)往返運(yùn)費(fèi)

• 批次預(yù)留：一次性鎖定 3 批，每批 1 mg，保證大論文前后數(shù)據(jù)一致性

• 技術(shù)支持：包含腎素-AGT 酶切反應(yīng)緩沖液配方（pH 7.4, 150 mM NaCl, 0.1 % BSA），省兩周條件優(yōu)化

9. 下單模板直接復(fù)制

產(chǎn)品：Human SerpinA8/AGT, HEK293規(guī)格：1 mg，凍干COA：要求 SDS-PAGE、LC-MS、腎素活性、內(nèi)毒素貨期：≤ 10 工作日售后：活性不足包退換，批次可預(yù)留