BAFF/BLyS/TNFSF13B 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)全景：讓實驗室數(shù)據(jù)直接對標(biāo)臨床申報

同一管試劑，今天做流式，明天做 ELISA，沒有統(tǒng)一標(biāo)尺，結(jié)果只能發(fā)“僅供參考"的推文

國際命名與基因編號：TNFSF13B 才是注冊文件里的真名

WHO 登記蛋白符號 TNFSF13B，基因 ID 10673。申報資料寫 BLyS 會被 CDE 退回補正，理由“非標(biāo)準(zhǔn)命名"。采購合同、COA、申報資料三處名稱必須一致，差一個字母就是發(fā)補 30 天。

活性單位定義：ED50 ≤1 ng/mL 的 Ramos 細(xì)胞存活模型

行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)采用 Ramos B 細(xì)胞存活實驗，ED50 ≤1 ng/mL 為活性單位下限。實驗條件 RPMI-1640 無血清、起始密度 2×10? cells/200 µL、48 h 后 Alamar Blue 讀數(shù)。曲線 R2≥0.98，信噪比≥10，否則批次判不合格。廠家 COA 缺失 Ramos raw data，活性聲明只能當(dāng)廣告看。

純度判定：SDS-PAGE 與 SEC-MALS 雙重門檻

SDS-PAGE ≥95% 單一條帶是底線，SEC-MALS 多聚體面積 ≤5% 才是臨床級。多聚體在 0.1% 也能激活 B 細(xì)胞，導(dǎo)致毒性放大。申報時藥監(jiān)局要求提供 MALS 原始圖譜，缺圖直接發(fā)補。收貨先跑一遍 Superdex 200，10 分鐘決定接受還是退貨。

內(nèi)毒素：0.1 EU/mg 對應(yīng) 5 µg/kg 劑量安全線

食蟹猴單次靜脈 5 µg/kg，內(nèi)毒素 0.1 EU/mg 時總內(nèi)毒素 0.0005 EU/kg，遠(yuǎn)低于 FDA 限值 5 EU/kg。做 CAR-T 體外培養(yǎng)時，培養(yǎng)液里 BAFF 濃度 50 ng/mL，內(nèi)毒素 0.1 EU/mg 能把背景 IL-6 壓到 30 pg/mL 以下。高于 0.5 EU/mg 的批次，體外實驗里 B 細(xì)胞活化標(biāo)記 CD69 直接飆高 3 倍，數(shù)據(jù)無法解釋。

糖基化位點：CHO 表達需注明 N-鏈接占型

CHO 系統(tǒng)在天冬酰胺 242 位引入 N-糖，占型差異讓分子量浮動 2 kDa。申報資料必須提供肽圖，糖基化位點覆蓋率 100%，缺圖就發(fā)補。做晶體學(xué)研究選 E.coli 無糖基化版本，避免糖鏈柔性干擾結(jié)晶。細(xì)胞學(xué)實驗用 CHO 版本，半衰期延長 1.7 倍，更貼近體內(nèi)環(huán)境。

標(biāo)品溯源：NIBSC 18/190 國際參考試劑

WHO 18/190 每支 5000 IU，賦值 1 IU = 0.034 µg。自建標(biāo)準(zhǔn)曲線前先用 18/190 做平行標(biāo)定，偏差 ≤10% 才被監(jiān)管認(rèn)可。缺標(biāo)定記錄的實驗室，現(xiàn)場核查會被判“定量準(zhǔn)確性無法保證"。買標(biāo)品時索要 TRC 證書，批號與瓶身激光碼必須一致，防止“貼牌"水貨。

批次放差：批間 CV ≤7% 的廠控方法

BAFF 黏性高，微孔板包被批次差異能把 CV 推到 12%。行業(yè)做法采用 15 nm 定向固相 + 0.2% PEG-8000 阻斷，批間 CV 壓到 6.2%。用戶驗收時隨機抽三批，80 pg/mL 質(zhì)控點 CV>7% 直接整批退貨，避免文章返修時補數(shù)據(jù)。

運輸條件：25 ℃ 7 天偏差 ≤5%

夏季快遞車廂 45 ℃ 持續(xù) 8 h，蛋白降解 k=0.002 h?1，7 天活性掉到 95%。廠家做 40 ℃ 28 天加速，偏差 ≤5% 對應(yīng)運輸風(fēng)險 <3%。收貨先掃碼查加速報告，缺失 40 ℃ 數(shù)據(jù)的批次直接拍照留證，售后索賠有憑據(jù)。

文件包：申報資料模板一次給齊

臨床 CMC 模塊 3 需要：

1. 活性 Ramos 報告

2. MALS 原始圖譜

3. 糖基化肽圖

4. NIBSC 標(biāo)定回執(zhí)

5. 加速穩(wěn)定性報告

廠家打包成 PDF，命名“BAFF_TNFSF13B_CMC_Package"，節(jié)省注冊部 3 天文件整理時間。缺一份就發(fā)補 30 天，項目進度直接晚一個季度。