小鼠 IgG2A 工作原理：從鉸鏈結(jié)構(gòu)到體內(nèi)半衰期

命名淵源：IgG2A 到底代表哪條基因

• 小鼠 Ig heavy constant gamma 2a 由 Ighg2a 基因座編碼，位于 12 號(hào)染色體，與 IgG1、IgG2B 并排

• 重鏈恒定區(qū) 330 aa，鉸鏈僅 11 aa，形成剛性桿，決定 Fc 取向

• 文獻(xiàn)常寫 IgG2a、IgG2A，大小寫混用，訂購(gòu)抗體時(shí)統(tǒng)一搜“Mouse IgG2A"避免漏單

鉸鏈短桿：二硫橋拓?fù)錄Q定蛋白酶切口

• Cys233-Cys238 形成額外橋，抗 IdeS 切割能力比 IgG1 高 4 倍

• 木瓜蛋白酶作用位點(diǎn)被遮蔽，F(xiàn)ab 得率僅 60 %，需延長(zhǎng)酶切時(shí)間至 16 h

• 做雙抗夾心 ELISA 時(shí)，捕獲抗體若選 IgG2A，檢測(cè)二抗必須抗小鼠 IgG2A 特異性，防止 IgG1 交叉

FcγR 親和譜：體內(nèi)功能放大器

• 小鼠 FcγRIII 結(jié)合 KD 0.8 μM，比 IgG1 高 2 倍，ADCC 窗口更寬

• FcγRIIB 抑制型受體 KD 2.3 μM，比例決定炎癥還是耐受

• 人源化改造把 2A 鉸鏈嫁接到人 IgG1，ADCC 提升 50 %，半衰期不變

糖型空白：NS0 與 CHO 的反差

• NS0 表達(dá)缺少 β-1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶，G0 占比 80 %，CDC 活性低

• CHO 表達(dá) G2 提升到 35 %，與 FcγRIIIa 結(jié)合力翻倍

• 做腫瘤治療模型，優(yōu)先選 CHO 來源 IgG2A 對(duì)照，避免糖型偏差掩蓋藥效

體內(nèi)半衰期：FcRn 回收曲線

• 小鼠靜脈注射 10 mg/kg，血濃遵循二相衰減，t1/2β 6.8 天，比 IgG1 長(zhǎng) 0.9 天

• FcRn 結(jié)合位點(diǎn) IHHN 突變?nèi)コ螅胨テ诘?1.2 天，驗(yàn)證 FcRn 依賴性

• 人 FcRn 轉(zhuǎn)基因小鼠中，人 IgG1 與鼠 IgG2A 半衰期接近，可互換做 PK 對(duì)照

免疫激活閾值：補(bǔ)體與細(xì)胞因子

• C1q 結(jié)合 KD 1.1 μM，需 30 μg/mL 以上才看到 CDC

• LPS 放大模型里，IgG2A 免疫復(fù)合物誘導(dǎo) IL-6 峰值 1800 pg/mL，IgG1 僅 600 pg/mL

• 做細(xì)胞因子風(fēng)暴研究，選擇 IgG2A 亞類更容易觸發(fā)表型

亞類干擾：雙抗夾心如何避免誤判

• 小鼠血清本身 IgG2A 背景 20-30 μg/mL，做 ELISA 時(shí)線性范圍上限 500 pg/mL

• 捕獲抗體若為人源 IgG 抗小鼠 IgG2A，檢測(cè)抗體需選抗人 κ 輕鏈，阻斷內(nèi)源干擾

• 血清稀釋梯度從 1:100 起跳，減少基質(zhì)效應(yīng)，回收率保持在 90-110 %

熒光染色：Fc 阻斷一步不可省

• 流式檢測(cè)小鼠脾臟 CD86，常用抗小鼠 IgG2A 二抗

• FcγRIIB/III 表達(dá)細(xì)胞會(huì)把 IgG2A 吸附，造成 15 % 假陽性

• 預(yù)孵育 2.4G2 抗體 10 μg/mL，5 min 完成 Fc 阻斷，背景降至 1 % 以下