山羊抗人IgG（A21050）維修保養(yǎng)：讓二抗活到保質(zhì)期最后一滴

收貨當(dāng)天必須做的體檢

原瓶抵達(dá)后立刻放4 ℃緩霜，避免甘油局部結(jié)晶。離心1 min 2000 ×g，把管壁液滴收到底部，測(cè)OD280 乘1.4 估算濃度，誤差>10% 直接退貨。HRP 版本順手測(cè)RZ=A403/A280，<0.4 說(shuō)明酶失活過(guò)半，ECL 信號(hào)會(huì)提前衰竭。

分裝體積算到微升

每管一次實(shí)驗(yàn)用量+10% 富余，50 μL 是WB 常用臨界點(diǎn)，低于30 μL 蒸發(fā)量占比陡升。用0.5 mL 低蛋白吸附管，管底錐形設(shè)計(jì)減少死角。熒光標(biāo)記版避光鋁箔紙包兩層，貼標(biāo)簽寫日期和批號(hào)，避免-80 ℃ 結(jié)霜后字跡消失。

凍融循環(huán)硬上限

A21050 原液含50% 甘油，-20 ℃ 仍保持液態(tài)，凍融一次指從-20 ℃ 升到室溫再回凍。實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)顯示第5 次凍融后ELISA 效價(jià)掉15%，第7 次掉30%。把分裝管插進(jìn)PCR 冰盒里分批取用，能把升溫時(shí)間壓到3 min，減少一次算一次。

4 ℃存放隱形殺手

很多人把HRP 二抗放4 ℃ 抽屜超過(guò)兩個(gè)月，背景開始飄。原因是微量細(xì)菌分泌蛋白酶，切割抗體Fc 段。每?jī)芍苡?.22 μm 濾頭壓濾一次，能延長(zhǎng)到8 周不變質(zhì)。加0.02% NaN? 可抑菌，但NaN? 會(huì)抑制HRP 活性，ECL 信號(hào)掉20%，只能選其一。

熒光染料褪色曲線

Alexa Fluor 488 標(biāo)記A21050 在4 ℃ 避光六周，亮度剩95%，八周跌到85%，十二周只剩70%。-80 ℃ 存放一年亮度維持92%，但凍融三次后跌到78%。真的要用老批號(hào)，把濃度提高30% 補(bǔ)償亮度，別直接延長(zhǎng)曝光時(shí)間，背景會(huì)一起漲。

酶活挽救急救法

HRP 信號(hào)突然變?nèi)?，可? mg/mL 過(guò)氧化氫 pulse 30 s，再進(jìn)ECL，酶活能回彈10–15%。原理是低濃度過(guò)氧化物把HRP 的Fe3?  inactive 形式重新氧化成Fe2? active 形式，pulse 時(shí)間超過(guò)60 s 會(huì)直接失活，需要秒表計(jì)時(shí)。

污染識(shí)別與切除

原液出現(xiàn)絮狀沉淀，10000 ×g 離心10 min，取上清測(cè)效價(jià)。若效價(jià)無(wú)變化，沉淀為變性蛋白，丟棄沉淀即可；若效價(jià)同步下降，說(shuō)明整批已經(jīng)聚合，繼續(xù)用會(huì)把背景抬高一個(gè)數(shù)量級(jí)，直接整管報(bào)廢，別心疼。

設(shè)備校準(zhǔn)聯(lián)動(dòng)保養(yǎng)

每次做ECL 前，用舊批號(hào)A21050 跑系統(tǒng)適用性：0.5 ng 人IgG 必須出條帶，灰度值落在既定區(qū)間 0.8–1.2 AU。出新批號(hào)再跑一遍，偏差>15% 說(shuō)明保存或運(yùn)輸出問(wèn)題，立即啟動(dòng)退換流程，避免整批實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)漂移。

成本控制小技巧

年度需求>50 mL 的實(shí)驗(yàn)室，與供應(yīng)商簽分批發(fā)貨協(xié)議，每月到一瓶新鮮批號(hào)，減少單次囤貨。原液濃度 1 mg/mL 夠用，不要選 2 mg/mL 高濃度版，高濃度在凍融時(shí)聚合速度更快，實(shí)際用下來(lái)更浪費(fèi)。