產(chǎn)品簡介：

Bst 法易錯 RCA（Error-Prone Rolling Circle Amplification）是利用 Bst DNA 多聚酶在一定條件下（如不同的 dNTP 濃度、不同的 Mg 濃度和 MnCl2 存在時） 能夠按較高的機率引入隨機引入突變。Bst 法易錯 RCA 彌補了phi29 法易錯RCA 的巨大缺陷，其中一個缺陷是易錯 PCR 沒法使用短的 DNA 片段，因為 PCR 引物就占了 40 個 bp 左右，故不適合小片段 DNA 突變。但任何短鏈 DNA 經(jīng)過環(huán)化后，均可進行易錯 RCA，故易錯 RCA 可以對短的 DNA 片段進行突變。環(huán)狀 DNA 模板易錯RCA 示意圖如下：

產(chǎn)品特點：

1.即開即用，十分簡單方便，用戶不需要辛苦摸索條件。

2.Bst DNA 聚合酶保真性弱于phi29 DNA 聚合酶，故突變率比 phi29 法易錯 RCA 更高，一般能產(chǎn)生 5-8 個突變/kb。如果需要更高的突變率，只需把上一次 Bst 法易錯 RCA 的產(chǎn)物用作下一次易錯 RCA 的模板即可。

3.反應溫度比 phi29 法易錯 RCA 更高，故可以使用一對或多對靶分子專一性引物進行 RCA，提高反應的專一性。

4.不需要進行預變性，可以直接在 65℃進行擴增。

5.靶分子 DNA 既可以是長度只有幾十 bp 的小片段 DNA，如啟動子，適配子，酶活性區(qū)，核糖體結(jié)合區(qū)等，也可以是質(zhì)粒，BAC，YAC 或全基因組。只是短的DNA 需要預先環(huán)化。

6.本試劑盒不含突變短的 DNA 所需要的環(huán)化試劑。

7.試劑含有熒光染料，可以實時檢測反應情況，隨時終止。也避免電泳，節(jié)約珍貴的擴增產(chǎn)物。

8.擴增產(chǎn)物可以直接用于酵母轉(zhuǎn)化和培養(yǎng)細胞轉(zhuǎn)染。

9.RCA 屬于恒溫擴增，只需要水浴或金屬浴，不需要貴重的 PCR 儀器。

10.本產(chǎn)品足夠 50 次 20uL 體系的易錯 RCA 反應。

11.易錯滾環(huán)擴增試劑盒（Bst 法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

保存和運輸

低溫運輸，-20℃保存,有效期為一年。

自備試劑

環(huán)狀 DNA 模板、超純水。

使用方法：

1.首-次使用本試劑盒時，需要在裝易錯 RCA 引物干粉的黃蓋管中加入 55uL 的自備超純水，吹打混勻后短暫離心，放冰上待用。沒有用完的引物需要放-20℃保存。

2.設置 20uL 體系的易錯 RCA 反應。以下以一個樣為例，每個樣本最好設置兩個濃度，每次實驗設置一個無模板陰性對照：

成分濃 度 1 濃 度 2 陰 性 對 照

4×易錯PCR 預混液5 uL5 uL5 uL

易錯 RCA 引物1 uL1 uL1 uL 易錯 RCA 專用 MnCl21 uL1 uL1 uL 環(huán)狀 DNA 模板1ng50ng不加

補自備超純水到19 uL19 uL19 uL

易錯 RCA 專用 DNA 聚合酶1 uL1 uL1 uL

3.65℃保溫 24 小時，每 10 分鐘設置為一個循環(huán)，在 SYBR 通道采集熒光信號。

4.實時檢查易錯 RCA 熒光信號，在兩種情況下可以立即終止實驗，不一定要等 24 小時結(jié)束。一是兩個濃度模板中任何一個的熒光信號進入 S 型平臺期，二是無模板陰性對照的熒光信號正好要爬升而樣品的熒光信號已經(jīng)爬升，此時可終止實驗，將樣本的擴增產(chǎn)物進行后續(xù)處理。

5.擴增結(jié)束后，對有擴增信號的樣品，按常規(guī)操作進行 DNA 回收，再限制性內(nèi)切酶酶切驗證。如果得到預期大小的片段，則膠回收 DNA，再進行克隆和測序等后續(xù)操作。

6.易錯 RCA 的擴增產(chǎn)品可以用水稀釋 10 倍后，再進行全基因組擴增，得到更多的DNA，然后再進行酶切，膠回收，克隆等后續(xù)操作。

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