產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Tris 飽和 PCI 混合液（pH7.5，25:24:1，DNA 提取專(zhuān)用）是 Tris PCI 的 25:24:1 的混合液，pH 偏堿性，用于 DNA 提取時(shí)去除蛋白質(zhì)、多糖、脂類(lèi)和酚類(lèi)等雜質(zhì)。本產(chǎn)品不能用于 RNA 提取。DNA 純化時(shí)苯-酚的作用是使裂解液中的蛋白質(zhì)變性，同時(shí)抑制 DNase 對(duì) DNA 的降解作用。用苯-酚處理裂解液時(shí)，由于蛋白分子表面的很多極性基團(tuán)與苯-酚相似相溶，故蛋白分子溶于酚相，而 DNA 溶于水相，從而將 DNA 和蛋白質(zhì)分開(kāi)。由于苯-酚與 水有一定比例的互溶，所以如果使用非飽和酚，樣品中的水分（含 DNA）會(huì)進(jìn)入酚相，樣品會(huì)丟失。同時(shí)水相中也會(huì)有少量的酚，這些殘留的酚會(huì)抑制后續(xù)酶反應(yīng)。而飽和酚就沒(méi)有丟失樣品的缺點(diǎn)，因?yàn)樗呀?jīng)提前充分吸足了水分（飽和酚中含 10%左右的水分），因此不會(huì)丟失樣品。但由于仍然會(huì)有少數(shù)酚進(jìn)入水相，抑制后續(xù)反應(yīng)。氯仿的作用是讓水和酚徹-底分開(kāi)，不互溶，徹-底去除水相中的殘留苯-酚，從水溶液中沉淀得到的 DNA 就沒(méi)有酚污染。異戊醇的作用是降低表面張力，從而減少操作過(guò)程（常常有震蕩步驟）中氣泡的產(chǎn)生，而這些氣泡的表面張力可能會(huì)使 DNA 斷裂。另外，異戊醇還有助于水相和酚相分相，使離心后的上層水相（含 DNA）、中間的變性蛋白相及下層有機(jī)溶劑相維持穩(wěn)定，便于移取上清。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分 規(guī)格包裝

Tris PCI 混合液（pH7.5，

25:24:1，DNA 提取專(zhuān)用）250 mL250 mL

棕色玻璃瓶

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存，有效期 12 個(gè)月。

自備試劑

如果用于沉淀法回收 DNA，則需要無(wú)水乙醇或異丙醇、3M 乙酸鈉溶液 pH5.2、 75%乙醇和超純水。如果用于過(guò)柱法回收 DNA，則需要硅膠模離心吸附柱，上

柱液，洗柱液和超純水。

使用方法：

該試劑為 DNA 提取過(guò)程中的常用試劑，使用方法參考分子克隆手冊(cè)等參考書(shū)， 或?qū)嶒?yàn)室 SOP。下列操作僅以 0.5mL 樣本供參考。

一、沉淀法：

1.將 0.5mL 含 DNA 的細(xì)胞裂解液，或含有 DNA、RNA、蛋白質(zhì)、脂類(lèi)的混合液轉(zhuǎn)移到 1.5mL 塑料離心管中。

2.加入等體積的本產(chǎn)品，即 0.5mL。

3.渦旋震蕩 2 分鐘。

4.常溫 13000g 離心 5 分鐘，溶液將呈兩層相。將含有 DNA 的無(wú)色水相轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中，剩下的有機(jī)相將呈藍(lán)色。兩相的相對(duì)位置跟樣本比重有關(guān)，并不是任何時(shí)候無(wú)色水相都在上層。如果樣本含鹽濃度高，比重大，  也可能在下層。

5.在上清中加入 0.1 倍體積的 3M 乙酸鈉溶液，pH5.2 和兩倍體積自備無(wú)水乙醇（兩倍體積乙醇可以用一倍體積異丙醇替代），顛倒 10 次充分混勻。

6.常溫 13000g 離心 15 分鐘。

7.小心棄上清，不要觸及管底離心面的沉淀。

8.加入 1mL 75%乙醇，顛倒 10 次。

9.常溫 13000g 離心 3 分鐘。

10.小心棄上清后短暫離心 30 秒，去掉殘留的液體（約 50uL）。

11.室溫敞開(kāi)蓋子兩分鐘。

12.加入超純水溶解 DNA，然后進(jìn)行濃度測(cè)定、電泳，PCR 等后續(xù)檢測(cè)。

二、過(guò)柱法：

13.將 0.5mL 含 DNA 的細(xì)胞裂解液，或含有 DNA、RNA、蛋白質(zhì)、脂類(lèi)的混

合液轉(zhuǎn)移到 1.5mL 塑料離心管中。

14.加入等體積的本產(chǎn)品，即 0.5mL。

15.渦旋震蕩 2 分鐘。

16.常溫 13000g 離心 5 分鐘，溶液將呈兩層相。將含有 DNA 的無(wú)色水相轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中，剩下的有機(jī)相將呈藍(lán)色。兩相的相對(duì)位置跟樣本比重有關(guān)，并不是任何時(shí)候無(wú)色水相都在上層。如果樣本含鹽濃度高，比重大，  也可能在下層。

17.在上清中加入 1-2 倍體積自備上柱液，所用體積跟所用上柱液的配方相關(guān)。

18.顛倒混勻，取 0.7mL 混合液上柱。

19.常溫 13000g 離心半分鐘，棄穿透液。

20.再取 0.7mL 樣本-上柱液混合液上同一個(gè)柱子。

21.常溫 13000g 離心半分鐘，棄穿透液。

22.重復(fù)第 20-第 21 步，直到混合液全部上柱。

23.加入 0.7mL 洗柱液。

24.常溫 13000g 離心半分鐘，棄穿透液。

25.重復(fù)第 23-第 24 步一次。

26.不加任何溶液，將吸附柱離心半分鐘。

27.在吸附柱中加入 30-50uL 的超純水，室溫放置 2 分鐘后，將吸附柱放入一個(gè)新的 1.5mL 離心管中，13000g 離心半分鐘，收集的穿透液就是純化的 DNA 溶液。

28. 對(duì)所得的 DNA 溶液進(jìn)行濃度測(cè)定、電泳，PCR 等后續(xù)檢測(cè)。

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