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ELISA試驗主要操作步驟的技術(shù)要求和注意事項
一．試劑的準備
1.放冰箱內(nèi)保存的試劑、在使用前應(yīng)先恢復到室溫，一般在室溫平衡30分鐘
2.仔細檢查試劑各組分是否變質(zhì)
3.濃縮的洗滌液需用新鮮的蒸餾水或去離子水按要求稀釋，使用不合格的蒸餾水可能使空白值增高增高
4.保存試劑的冰箱應(yīng)定期檢查其貯存溫度（正常為2-8℃），并盡量避免冰箱頻繁開關(guān)
1.放冰箱內(nèi)保存的試劑、在使用前應(yīng)先恢復到室溫，一般在室溫平衡30分鐘
2.仔細檢查試劑各組分是否變質(zhì)
3.濃縮的洗滌液需用新鮮的蒸餾水或去離子水按要求稀釋，使用不合格的蒸餾水可能使空白值增高增高
4.保存試劑的冰箱應(yīng)定期檢查其貯存溫度（正常為2-8℃），并盡量避免冰箱頻繁開關(guān)
二．標本的采取與保存
1.盡量避免溶血
2.血清標本的制備：非抗凝自然凝固1-2小時，3000rpm離心15分鐘
3.血漿標本的制備：使用含有抗凝劑的采血管采血，顛倒混勻放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘
4 .標本宜在新鮮時檢測。若5天內(nèi)檢測，可使用冰箱2-8℃保存，超過一周時間測定，應(yīng)于-20℃低溫凍存
5.反復凍溶會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存做多次檢測，宜少量分裝凍存
1.盡量避免溶血
2.血清標本的制備：非抗凝自然凝固1-2小時，3000rpm離心15分鐘
3.血漿標本的制備：使用含有抗凝劑的采血管采血，顛倒混勻放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘
4 .標本宜在新鮮時檢測。若5天內(nèi)檢測，可使用冰箱2-8℃保存，超過一周時間測定，應(yīng)于-20℃低溫凍存
5.反復凍溶會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存做多次檢測，宜少量分裝凍存
三．加樣
1． 嚴格按照說明書要求，按規(guī)定的量和順序進行
2． 使用的微量加樣器應(yīng)注意保養(yǎng)并定期校正
3． 加樣前應(yīng)使溶液充分混勻，并將液體加在孔底，避免加在孔壁上部，注意不可出現(xiàn)氣泡
4． 加樣時避免樣本濺出，如有樣本濺出孔外時，應(yīng)用吸水紙輕輕拭干，并做相應(yīng)記錄
5． 加樣后微孔板應(yīng)及時溫育，盡量縮短加樣后溫育前的等待時間
1． 嚴格按照說明書要求，按規(guī)定的量和順序進行
2． 使用的微量加樣器應(yīng)注意保養(yǎng)并定期校正
3． 加樣前應(yīng)使溶液充分混勻，并將液體加在孔底，避免加在孔壁上部，注意不可出現(xiàn)氣泡
4． 加樣時避免樣本濺出，如有樣本濺出孔外時，應(yīng)用吸水紙輕輕拭干，并做相應(yīng)記錄
5． 加樣后微孔板應(yīng)及時溫育，盡量縮短加樣后溫育前的等待時間
四．溫育
1． 嚴格按照說明書要求，按規(guī)定的溫度和溫育時間進行
2． 保溫容器是恒溫水浴箱，可使溫度很快達到平衡
3． 微孔板不可重疊放置，以免傳熱不均勻
4． 為避免孔內(nèi)液體蒸發(fā)，可用封板膠將ELISA板面密封后進行溫育
5． 溫育時盡量少開啟恒溫箱門，不能人為縮短或延長溫育時間
1． 嚴格按照說明書要求，按規(guī)定的溫度和溫育時間進行
2． 保溫容器是恒溫水浴箱，可使溫度很快達到平衡
3． 微孔板不可重疊放置，以免傳熱不均勻
4． 為避免孔內(nèi)液體蒸發(fā)，可用封板膠將ELISA板面密封后進行溫育
5． 溫育時盡量少開啟恒溫箱門，不能人為縮短或延長溫育時間
五．洗板
1． 微孔板每遍洗板次數(shù)一般為3次，每次設(shè)計浸泡時間一般為30-60秒
2． 洗板時需保證微孔板平放，將洗滌液注滿各孔，但盡量避免漏液溢液現(xiàn)象
3． 每次洗板的液體殘留量不宜過多，洗完后，應(yīng)將微孔板在吸水紙上輕輕拍干
4． 配置洗滌液需要新鮮無污染的蒸餾水或去離子現(xiàn)配現(xiàn)用
5． 盛放洗滌液的容器應(yīng)定期使用清潔劑清洗，避免長菌或其它污染
1． 微孔板每遍洗板次數(shù)一般為3次，每次設(shè)計浸泡時間一般為30-60秒
2． 洗板時需保證微孔板平放，將洗滌液注滿各孔，但盡量避免漏液溢液現(xiàn)象
3． 每次洗板的液體殘留量不宜過多，洗完后，應(yīng)將微孔板在吸水紙上輕輕拍干
4． 配置洗滌液需要新鮮無污染的蒸餾水或去離子現(xiàn)配現(xiàn)用
5． 盛放洗滌液的容器應(yīng)定期使用清潔劑清洗，避免長菌或其它污染
六．顯色
1． 堅持不使用過期顯色劑，肉眼可見淺蘭色的TMB顯色劑不能使用
2． 顯色劑避免接觸金屬器械，避免在空氣中暴露時間過長
3． 加顯色劑盡量避免濺出孔外
1． 堅持不使用過期顯色劑，肉眼可見淺蘭色的TMB顯色劑不能使用
2． 顯色劑避免接觸金屬器械，避免在空氣中暴露時間過長
3． 加顯色劑盡量避免濺出孔外
七．終止顯色完后應(yīng)及時終止，加終止液時避免出現(xiàn)氣泡
八．結(jié)果判斷
1． 按說明書的規(guī)定進行讀數(shù)和結(jié)果判斷
2． 酶標儀讀數(shù)時應(yīng)保證微孔板底部清潔，定期清洗酶標儀濾光片
3． 建議盡量使用雙波長酶標儀讀值，單波長讀值應(yīng)扣除空白對照值
1． 按說明書的規(guī)定進行讀數(shù)和結(jié)果判斷
2． 酶標儀讀數(shù)時應(yīng)保證微孔板底部清潔，定期清洗酶標儀濾光片
3． 建議盡量使用雙波長酶標儀讀值，單波長讀值應(yīng)扣除空白對照值
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