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ELISA試驗(yàn)主要操作步驟的技術(shù)要求和注意事項(xiàng)
ELISA試驗(yàn)主要操作步驟的技術(shù)要求和注意事項(xiàng)
一．試劑的準(zhǔn)備
1.放冰箱內(nèi)保存的試劑、在使用前應(yīng)先恢復(fù)到室溫，一般在室溫平衡30分鐘
2.仔細(xì)檢查試劑各組分是否變質(zhì)
3.濃縮的洗滌液需用新鮮的蒸餾水或去離子水按要求稀釋，使用不合格的蒸餾水可能使空白值增高增高
4.保存試劑的冰箱應(yīng)定期檢查其貯存溫度（正常為2-8℃），并盡量避免冰箱頻繁開關(guān)
1.放冰箱內(nèi)保存的試劑、在使用前應(yīng)先恢復(fù)到室溫，一般在室溫平衡30分鐘
2.仔細(xì)檢查試劑各組分是否變質(zhì)
3.濃縮的洗滌液需用新鮮的蒸餾水或去離子水按要求稀釋，使用不合格的蒸餾水可能使空白值增高增高
4.保存試劑的冰箱應(yīng)定期檢查其貯存溫度（正常為2-8℃），并盡量避免冰箱頻繁開關(guān)
二．標(biāo)本的采取與保存
1.盡量避免溶血
2.血清標(biāo)本的制備：非抗凝自然凝固1-2小時(shí)，3000rpm離心15分鐘
3.血漿標(biāo)本的制備：使用含有抗凝劑的采血管采血，顛倒混勻放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘
4 .標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。若5天內(nèi)檢測(cè)，可使用冰箱2-8℃保存，超過一周時(shí)間測(cè)定，應(yīng)于-20℃低溫凍存
5.反復(fù)凍溶會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存做多次檢測(cè)，宜少量分裝凍存
1.盡量避免溶血
2.血清標(biāo)本的制備：非抗凝自然凝固1-2小時(shí)，3000rpm離心15分鐘
3.血漿標(biāo)本的制備：使用含有抗凝劑的采血管采血，顛倒混勻放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘
4 .標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。若5天內(nèi)檢測(cè)，可使用冰箱2-8℃保存，超過一周時(shí)間測(cè)定，應(yīng)于-20℃低溫凍存
5.反復(fù)凍溶會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存做多次檢測(cè)，宜少量分裝凍存
三．加樣
1． 嚴(yán)格按照說明書要求，按規(guī)定的量和順序進(jìn)行
2． 使用的微量加樣器應(yīng)注意保養(yǎng)并定期校正
3． 加樣前應(yīng)使溶液充分混勻，并將液體加在孔底，避免加在孔壁上部，注意不可出現(xiàn)氣泡
4． 加樣時(shí)避免樣本濺出，如有樣本濺出孔外時(shí)，應(yīng)用吸水紙輕輕拭干，并做相應(yīng)記錄
5． 加樣后微孔板應(yīng)及時(shí)溫育，盡量縮短加樣后溫育前的等待時(shí)間
1． 嚴(yán)格按照說明書要求，按規(guī)定的量和順序進(jìn)行
2． 使用的微量加樣器應(yīng)注意保養(yǎng)并定期校正
3． 加樣前應(yīng)使溶液充分混勻，并將液體加在孔底，避免加在孔壁上部，注意不可出現(xiàn)氣泡
4． 加樣時(shí)避免樣本濺出，如有樣本濺出孔外時(shí)，應(yīng)用吸水紙輕輕拭干，并做相應(yīng)記錄
5． 加樣后微孔板應(yīng)及時(shí)溫育，盡量縮短加樣后溫育前的等待時(shí)間
四．溫育
1． 嚴(yán)格按照說明書要求，按規(guī)定的溫度和溫育時(shí)間進(jìn)行
2． 保溫容器是恒溫水浴箱，可使溫度很快達(dá)到平衡
3． 微孔板不可重疊放置，以免傳熱不均勻
4． 為避免孔內(nèi)液體蒸發(fā)，可用封板膠將ELISA板面密封后進(jìn)行溫育
5． 溫育時(shí)盡量少開啟恒溫箱門，不能人為縮短或延長溫育時(shí)間
1． 嚴(yán)格按照說明書要求，按規(guī)定的溫度和溫育時(shí)間進(jìn)行
2． 保溫容器是恒溫水浴箱，可使溫度很快達(dá)到平衡
3． 微孔板不可重疊放置，以免傳熱不均勻
4． 為避免孔內(nèi)液體蒸發(fā)，可用封板膠將ELISA板面密封后進(jìn)行溫育
5． 溫育時(shí)盡量少開啟恒溫箱門，不能人為縮短或延長溫育時(shí)間
五．洗板
1． 微孔板每遍洗板次數(shù)一般為3次，每次設(shè)計(jì)浸泡時(shí)間一般為30-60秒
2． 洗板時(shí)需保證微孔板平放，將洗滌液注滿各孔，但盡量避免漏液溢液現(xiàn)象
3． 每次洗板的液體殘留量不宜過多，洗完后，應(yīng)將微孔板在吸水紙上輕輕拍干
4． 配置洗滌液需要新鮮無污染的蒸餾水或去離子現(xiàn)配現(xiàn)用
5． 盛放洗滌液的容器應(yīng)定期使用清潔劑清洗，避免長菌或其它污染
1． 微孔板每遍洗板次數(shù)一般為3次，每次設(shè)計(jì)浸泡時(shí)間一般為30-60秒
2． 洗板時(shí)需保證微孔板平放，將洗滌液注滿各孔，但盡量避免漏液溢液現(xiàn)象
3． 每次洗板的液體殘留量不宜過多，洗完后，應(yīng)將微孔板在吸水紙上輕輕拍干
4． 配置洗滌液需要新鮮無污染的蒸餾水或去離子現(xiàn)配現(xiàn)用
5． 盛放洗滌液的容器應(yīng)定期使用清潔劑清洗，避免長菌或其它污染
六．顯色
1． 堅(jiān)持不使用過期顯色劑，肉眼可見淺蘭色的TMB顯色劑不能使用
2． 顯色劑避免接觸金屬器械，避免在空氣中暴露時(shí)間過長
3． 加顯色劑盡量避免濺出孔外
1． 堅(jiān)持不使用過期顯色劑，肉眼可見淺蘭色的TMB顯色劑不能使用
2． 顯色劑避免接觸金屬器械，避免在空氣中暴露時(shí)間過長
3． 加顯色劑盡量避免濺出孔外
七．終止顯色完后應(yīng)及時(shí)終止，加終止液時(shí)避免出現(xiàn)氣泡
八．結(jié)果判斷
1． 按說明書的規(guī)定進(jìn)行讀數(shù)和結(jié)果判斷
2． 酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)應(yīng)保證微孔板底部清潔，定期清洗酶標(biāo)儀濾光片
3． 建議盡量使用雙波長酶標(biāo)儀讀值，單波長讀值應(yīng)扣除空白對(duì)照值
1． 按說明書的規(guī)定進(jìn)行讀數(shù)和結(jié)果判斷
2． 酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)應(yīng)保證微孔板底部清潔，定期清洗酶標(biāo)儀濾光片
3． 建議盡量使用雙波長酶標(biāo)儀讀值，單波長讀值應(yīng)扣除空白對(duì)照值
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