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您的ELISA試劑盒實驗失敗的原因究竟是什么?

來源:廈門侖昌碩生物科技有限公司   2020年06月09日 11:25  

現(xiàn)在的elisa試劑盒可謂魚龍混雜,難辨好壞,因為具有靈敏度高、特異性強,操作方法簡便快速、無放射性污染以及應(yīng)用范圍廣等很多優(yōu)點,已經(jīng)被許多的科研朋友所應(yīng)用,雖說是操作簡便快速,但是稍稍的不注意,實驗就可能會失敗,今天,上海古朵來為您找找ELISA試劑盒實驗失敗的原因究竟是什么?

操作注意:
1. 溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性??赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍色,產(chǎn)生假陽性。所以嚴重溶血標本禁用。

2. 標本受細菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。

3. 標本保存不當。在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、造成假陽性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5 d內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時應(yīng)輕柔,不可強烈振蕩。

塑料試管能吸附抗原物質(zhì),樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。好使用真空采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,EDTA、酶抑制劑可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。

標本凝固不全。 在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

上海古朵生物科技有限公司秉承“信譽、質(zhì)量、品牌、誠信為本"的理念,以優(yōu)良的服務(wù)質(zhì)量和實惠的價格,ELISA試劑盒實驗前,請仔細閱讀中英文說明書,我們提供免費代測,實驗過程指導(dǎo)服務(wù),詳情咨詢上海古朵在線客服。

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