您的ELISA試劑盒實驗失敗的原因究竟是什么?

現(xiàn)在的elisa試劑盒可謂魚龍混雜，難辨好壞，因為具有靈敏度高、特異性強，操作方法簡便快速、無放射性污染以及應(yīng)用范圍廣等很多優(yōu)點，已經(jīng)被許多的科研朋友所應(yīng)用，雖說是操作簡便快速，但是稍稍的不注意，實驗就可能會失敗，今天，上海古朵來為您找找ELISA試劑盒實驗失敗的原因究竟是什么？

操作注意：
1. 溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性?？赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(zhì)（紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍色，產(chǎn)生假陽性。所以嚴重溶血標本禁用。

2. 標本受細菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。

3. 標本保存不當。在冰箱中保存過久的標本，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、造成假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5 d內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔，不可強烈振蕩。

塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。好使用真空采血管；并使用非抗凝標本，肝素抗凝血漿會增加OD值，EDTA、酶抑制劑可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。

標本凝固不全。 在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

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