細(xì)胞能量代謝服務(wù)Seahorse XF實驗中常見問題之二

Qustions&解答Answers

Seahorse XF 實驗常見問題及解答

16可以在Seahorse檢測液中加入血清嗎？

      不建議加入血清（如：FBS），因為其會影響檢測液的緩沖能力，并可能與進行檢測的藥物/化合物發(fā)生非特異性結(jié)合而影響檢測效果，同時容易產(chǎn)生氣泡。另外，使用加入血清的檢測液溶解藥物加載至探針板加藥孔中進行注射時，會出現(xiàn)漏藥或加藥注射失敗。

17加入底物的檢測液在多長時間內(nèi)可保持穩(wěn)定？或可以提前配好檢測液和藥物嗎？

      Seahorse檢測液在實驗當(dāng)天現(xiàn)用現(xiàn)配。藥物也要現(xiàn)配現(xiàn)用，溶解后的藥物要一次性用完，剩余的也不能用于下次實驗了。

18 Seahorse XF糖酵解壓力試劑盒中的藥物狀態(tài)看上去很奇怪，是否有質(zhì)量問題（或其他試劑盒中部分藥物）？

      如Glycolysis stress test kit中的2-DG，該藥可能是透明的液體、不透明的（白色的）固體，也可能是白色固體與透明液體的混合物，以上藥物狀態(tài)均不影響其性能，可按照說明書正常溶解使用。

19使用pH 7.4 的 XF DMEM 或 RPMI 基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備檢測液時，加上Seahorse的三個底物，是否就無需調(diào)整pH了？

      是的。使用推薦的 XF 三個底物，能確保分析培養(yǎng)基最終 pH 值的準(zhǔn)確。如果使用其他供應(yīng)商提供的其他品牌的補充劑，則無法保證培養(yǎng)基pH 值的準(zhǔn)確。啟封后的pH7.4的DMEM或RPMI基礎(chǔ)培養(yǎng)基，盡可能在一個月內(nèi)用完，以免pH值因為空氣中的CO2進去，影響pH值。

20Seahorse的基礎(chǔ)培養(yǎng)基與其他廠家的有啥不同？

       Seahorse XF 培養(yǎng)基專用于 XF 分析，推薦研究者使用，以獲得最佳試驗結(jié)果。XF 培養(yǎng)基以標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)基組分（DMEM 或 PRMI）為基礎(chǔ)，做了以下這些方面改進：

 無碳酸氫鹽和低緩沖容量：利于細(xì)胞外酸化率的檢測 

 無底物添加：適用于用戶的各種不同需求 

 低濃度酚紅或無酚紅：確保 pH 值測量的準(zhǔn)確性 

21請問進行FAO實驗時，能夠在探針板上加載BSA-palmitate使其在上機測量時自動注射入細(xì)胞孔嗎？

      Agilent建議將BSA-palmitate或相似底物在培養(yǎng)細(xì)胞時做預(yù)處理。如果實驗存在合理依據(jù)需在上機測量時通過注射加BSA-palmitate、血清或其他類似底物，請聯(lián)系相關(guān)技術(shù)支持。

22 為何不能使用XF base medium配制的檢測液進行Glycolytic rate與real-time ATP rate兩個實驗？

      XF base medium中含有酚紅，該物質(zhì)會影響這兩個實驗的測量。

23 為何不能使用GlutaMAX來代替Glutamine呢？

     不建議使用GlutaMAX來配制檢測液。因加入GlutaMAX后，還需細(xì)胞進一步將其轉(zhuǎn)化為glutamine，這可能會影響線粒體對Glutamine氧化的動力學(xué)過程。

24 檢測液的pH對XF實驗非常重要嗎？

    是的，Seahorse XF實驗通過測定細(xì)胞代謝物（如：氧和質(zhì)子）的變化來確定OCR 和ECAR，而檢測液pH會影響這些代謝物的產(chǎn)生或消耗，因此保持檢測液一致的 pH（37℃，pH=7.4± 0.1）非常重要。

25 FluxPak中的水化板可以替代細(xì)胞培養(yǎng)板嗎？

      不可以，雖然水化板與細(xì)胞培養(yǎng)板結(jié)構(gòu)相同，但不能用來培養(yǎng)細(xì)胞。

26 Seahorse 探針板上機前加藥，需要注意什么？

       加藥時同樣方法，槍頭抵著加藥孔壁大約與水平面呈45°度角，將液體一次性加入到加藥孔中，注意板子始終保持在平面上，加完藥的探針板不能晃動，以免加入的液體漏入水化板中。（24的機型，在加藥前需要取下粉色的水化輔助板）；

27 Seahorse 細(xì)胞板上機時候，放進去應(yīng)該就可以了？

       探針板和細(xì)胞板放入儀器時，朝向為A1孔朝向機器內(nèi)部，記得把蓋子拿掉；

28 Seahorse XF報告生成器中的代謝數(shù)據(jù)是如何計算的？

      在每個試劑盒的Seahorse XF報告生成器的用戶指南中詳細(xì)列出了數(shù)據(jù)的計算公式，請參閱。