常見問題解惑---慢病毒

常見問題解惑---慢病毒

一、慢病毒是什么？

慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)和特性：整合入宿主細(xì)胞基因組，長期表達(dá)，可用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備；但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組份和特性：比逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度，不僅可以感染分裂期細(xì)胞，更重要的，還能感染非分裂期的細(xì)胞。

吉?jiǎng)P提供的慢病毒為“zx”性病毒，即病毒感染目的細(xì)胞后不會(huì)再感染其他細(xì)胞，也不會(huì)利用宿主細(xì)胞產(chǎn)生新的病毒顆粒。慢病毒中的毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒。但該病毒仍然具有可能的潛在的生物學(xué)危險(xiǎn)

二、慢病毒如何稀釋？

慢病毒使用時(shí)，先將病毒從-80℃冰箱取出，冰浴融化，可使用D-hanks，PBS，生理鹽水或培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋。

三、慢病毒生物安全性如何？

重組慢病毒的生物安全等級(jí)被確定為II級(jí)，需要在生物安全級(jí)II級(jí)的條件下進(jìn)行慢病毒操作實(shí)驗(yàn)。

四、慢病毒如何保存？慢病毒的滴度單位是什么？

慢病毒長期保存則需放置于-80℃或更低溫度的環(huán)境中。在-80℃環(huán)境中慢病毒可以穩(wěn)定存放6個(gè)月以上。盡可能避免反復(fù)凍融，否則會(huì)降低病毒滴度。亞載提供的慢病毒的滴度單位是TU/ml (transduction units/ml) ，即每毫升中含有具有生物活性的慢病毒顆粒數(shù)。如：慢病毒滴度為 1E+8 TU/ml，即每毫升病毒液中含有1E+8個(gè)具有生物活性的慢病毒顆粒。

五、慢病毒使用安全注意事項(xiàng)有哪些？

1.病毒操作時(shí)建議使用生物安全柜。 如果使用普通超凈工作臺(tái)操作病毒，請(qǐng)不要打開排風(fēng)機(jī)；

2.病毒操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，帶口罩和手套；操作病毒時(shí)特別小心不要產(chǎn)生氣霧或飛濺。如果操作時(shí)超凈工作臺(tái)有毒污染，請(qǐng)立即用1%的SDS溶液擦拭干凈；

3.如需要離心，應(yīng)使用密封性好的離心管，或者用parafilm膜封口后離心，而且盡量使用組織或細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)的離心機(jī)；

4.用顯微鏡觀察細(xì)胞感染情況時(shí)應(yīng)遵從以下步驟：擰緊培養(yǎng)瓶或蓋緊培養(yǎng)板，用70%乙醇清理培養(yǎng)瓶外壁后拍照，離開顯微鏡實(shí)驗(yàn)臺(tái)之前，用70%乙醇清理顯微鏡載物臺(tái)；

5.廢棄的含過病毒的培養(yǎng)基中加入84消毒液（1:20左右），浸泡一天后丟棄。接觸過病毒的槍頭，離心管，培養(yǎng)板等其他物品可用84消毒液稀釋液處理，也可以用煮沸處理半小時(shí)或常規(guī)濕熱滅菌（121℃，20 min）；

6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用肥皂和水清洗雙手。