Western-blot樣品處理注意事項(xiàng)

樣品處理及保存

1、懸浮細(xì)胞樣品：

把細(xì)胞及培養(yǎng)液一起收集到15ml或者50ml離心管中，1500rpm離心3min，棄去上清；加入10ml 冷PBS輕輕吹打，1500rpm，4℃離心3min，棄去上清；反復(fù)2次；第二次棄去上清后，用1ml 冷PBS重懸細(xì)胞，移入1.5ml微型離心管，2500rpm（500g），4℃離心5分鐘，盡量去除所有殘留上清，于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下，一般保存1年，建議盡快檢測(cè)。

2、貼壁細(xì)胞樣品：

2.1胰酶消化：

用胰酶將細(xì)胞消化后，含血清的培養(yǎng)基中和胰酶，吹打，收集到15ml或者50ml離心管中，1500rpm離心3min，棄去上清；加入10ml 冷PBS輕輕吹打，1500rpm，4℃離心3min，棄去上清；反復(fù)2次；第二次棄去上清后，用1ml 冷PBS重懸細(xì)胞，移入1.5ml微型離心管，2500rpm（500g），4℃離心5分鐘，盡量去除所有殘留上清，于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下，一般保存1年，建議盡快檢測(cè)。

2.2細(xì)胞刮子收集細(xì)胞：

對(duì)于某些蛋白（即對(duì)胰酶比較敏感或者實(shí)驗(yàn)特殊要求，如E-Cadherin不易用胰酶消化后進(jìn)行WB檢測(cè)），直接用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞，連同培養(yǎng)基收集到15ml或者50ml離心管中，1500rpm離心3min，棄去上清；加入10ml 冷PBS輕輕吹打，1500rpm，4℃離心3min，棄去上清；反復(fù)2次；第二次棄去上清后，用1ml 冷PBS重懸細(xì)胞，移入1.5ml微型離心管，2500rpm（500g），4℃離心5分鐘，盡量去除所有殘留上清，于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下，一般保存1年，建議盡快檢測(cè)。

3、動(dòng)物組織樣品：

取下合適的動(dòng)物或者人的組織樣品后用預(yù)冷的PBS或者生理鹽水漂洗，盡量除盡殘留血液，用濾紙把多余PBS吸取干凈。把組織分成約50mg大?。ㄒ罁?jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰M(jìn)行調(diào)整），用錫紙分別包裝好或者用凍存管裝好，于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年，建議盡快檢測(cè)。

4、植物樣品：

取得待測(cè)植物樣品后，用蒸餾水把泥土漂洗干凈，用濾紙把多余水分吸取干凈，分裝成合適大小于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年，建議盡快檢測(cè)。

5、細(xì)菌樣品：

細(xì)菌培養(yǎng)完成后，10000rpm離心5min收集細(xì)菌，加入PBS吹打，10000rpm離心5min，棄去上清；反復(fù)3次，棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。

6、若要檢測(cè)磷酸化蛋白，請(qǐng)?jiān)?span>3個(gè)月內(nèi)進(jìn)行。

長(zhǎng)時(shí)間保存樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測(cè)不到磷酸化條帶。

7、提取胞漿、胞核蛋白的樣品應(yīng)盡量采用新鮮樣品

因?yàn)閮龃鏁?huì)使細(xì)胞漿、細(xì)胞核破裂。

8、血液樣品（血漿中蛋白）

3000rpm離心20min后收集上清，分裝后于-80度或者液氮凍存待用。3個(gè)月以內(nèi)檢測(cè)。

9、運(yùn)輸時(shí)間較長(zhǎng)或長(zhǎng)距離運(yùn)送樣品時(shí)采用干冰或者液氮。