關于elisa實驗問題的解決方法及建議

  由于實驗過分嚴謹，出現(xiàn)一些可控亦或不可控的因素，會對于實驗造成一些影響，也會導致一些問題的出現(xiàn)。對于實驗中可能出現(xiàn)的一些情況或者問題，我司有一些小小的建議及方案：

1. 加入反應終止液后，沒有吸光值或吸光值偏低？

①原因：未加入酶標記物。

解決辦法：請按照操作步驟進行。

②原因：試劑盒內容物未能充分回。

解決辦法：確定試劑盒內容物回溫后再進行操作。

③原因：室溫太低。

解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請于操作步驟4，適當延長溫育時間。

④原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。

解決辦法： 請用試劑盒內所提供的清洗液清洗。

⑤原因：試劑盒已過有效期限。

解決辦法：請更換成仍在有效期限內的試劑盒。

2. 標準曲線線性不佳，或是平行性不好？

①原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

解決辦法： 請確認溫育位置既不透光也不透風(如抽屜內)。

②原因：操作時間拖太久。

解決辦法：請在方法熟練后再進行操作。

③原因：微孔間相互污染。

解決辦法： 加樣品時，請小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

④原因：標準品或酶標記物所加入的量不一致。

解決辦法：請使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。

⑤原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確。

解決辦法：加樣品或試劑時，吸頭請勿接觸微孔。

⑥原因：洗板過程發(fā)生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進行下一步驟)。

解決辦法：請隨時監(jiān)控洗板機洗板過程，洗完后立即進行下一步驟。

3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)？

①原因：室溫太高(>25℃)。

解決辦法： 若無法降低室內溫度，請適當縮短步驟4的溫育時間。

②原因：底物溶液受到污染。

解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍色，請不要再使用。

③原因：反應時間超過太久。

解決辦法：請控制反應時間。

④原因：酶標記物污染了盒內其它試劑。

解決辦法：使用過的吸頭應立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)

4. 陰性標準品的吸光值低于陽性標準品的吸光值。

①原因：微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法： 試劑加完后，需輕敲盤四周使其充分混合均勻。

②原因：洗板過程發(fā)生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進行下一步驟.)。

解決辦法：請隨時監(jiān)控洗板機洗板過程，洗完后立即進行下一步驟。

③原因：添加樣品或酶標記物的量不一致。

解決辦法： 請使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。