植物超氧化物歧化酶（SOD）活性的測定

一、原理

將25℃時抑制鄰苯三酚自氧化速率50%所需的SOD定義為一個活力單位。在堿性條件下，鄰苯三酚會發(fā)生自氧化，可根據SOD抑制鄰苯三酚自氧化能力測定SOD活力。

二、試劑

1、A液：PH8.20 0.1mol/l三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液（內含1mmol/LEDTA·2Na）。稱取1.2114g三羥甲基氨基甲烷和37.2mgEDTA·2Na溶于62.4ml0.1mol/l鹽酸溶液中，用蒸餾水定溶至100ml。

2、B液：4.5mmol/l鄰苯三酚鹽酸溶液。稱取鄰苯三酚56.7mg溶于少量10mmol/l鹽酸溶液，并定容至100ml。

3、鹽酸溶液：10mmol/l

4、蒸餾水：二重石英蒸餾水。

三、儀器

1、紫外-可見分光光度計；

2、精密酸度計，0.01PH；

3、離心機；

4、10ml比色管；

5、10ml離心管；

6、玻璃乳缽。

四、測定步驟

1、植物超氧化物歧化酶樣品1.00g置于研缽中，加入9.0ml蒸餾水研磨5分鐘，移入10ml離心管。用少量蒸餾水沖洗研缽，洗液并入離心管中，加蒸餾水至刻度，經4000r/min離心15分鐘，取上清液測定。

2、在25℃左右，于10ml比色管中依次加入A液2.35ml，蒸餾水2.00ml，B液0.15ml。加入B液立即混合并傾入比色皿，分別測定在325nm波長條件下初始時和1Min后吸光度值，二者之差為鄰苯三酚自氧化速率△A₃₂₅（min^-1）為0.060。

3、在25℃左右，于10ml比色管中依次加入20.0ul樣液或酶液，A液2.35ml，蒸餾水2.00ml，B液0.15ml。加入B液立即混合并傾入比色皿，分別測定在325nm波長條件下初始時和1分鐘后吸光度值，二者之差為樣液或酶液抑制鄰苯三酚自氧化速率△A′₃₂₅（min^-1）。加入樣液或酶液的量使抑制鄰苯三酚自氧化速率為1/2△A′₃₂₅（min^-1），即0.030。

五、計算結果

SOD活力（u/g）=                            

式中：

V—加入樣液或酶液的體積，ml

△A₃₂₅—鄰苯三酚自氧化速率

△A′₃₂₅—樣液或酶液抑制鄰苯三酚自氧化速率

D—樣液或酶液的稀釋倍數

V₁—樣液總體積，ml

4.5—反應液總體積，ml

m—樣液的質量，ml